ВВЕДЕНИЕ ..............................................................................................................................................4
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ......................................................................................................11
1.1. История открытия сигнального пути Notch ................................................................................11
1.2. Канонический сигнальный путь Notch ........................................................................................12
1.3. Роль сигнального пути Notch в прогрессии опухолевых клеток ...............................................15
1.4. Роль сигнального пути Notch в прогрессии опухолей, обусловленной микроокружением ...20
1.4.1. Опухоль-ассоциированные фибробласты .................................................................................21
1.4.2. Иные типы клеточных компонентов .........................................................................................23
1.5. Терапевтические стратегии, связанные с сигнальным путем Notch .........................................27
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ..............................................................................................33
2.1. Клеточные линии и культуры .......................................................................................................33
2.2. РНК-интерференция .......................................................................................................................33
2.3. Экзогенная экспрессия...................................................................................................................35
2.4. Полимеразная цепная реакция ......................................................................................................35
2.5. Иммуноблоттинг ............................................................................................................................36
2.6. Микроскопия ..................................................................................................................................36
2.7. In vitro тесты ...................................................................................................................................37
2.8. Цитофлуориметрический анализ ..................................................................................................38
2.9. Анализ способности мезенхимальных клеток к дифференцировке ..........................................38
2.10. Антитела ........................................................................................................................................38
2.11. Люциферазный анализ .................................................................................................................39
2.12. Применение ингибитора γ-секретазы – DAPT ..........................................................................40
2.13. Применение TGF-β1 .....................................................................................................................40
2.14. Применение ингибиторов рецепторов TGF-β1 .........................................................................40
2.15. Иммуноферментный анализ TGF-β1 в культуральной среде ..................................................40
2.16. Эксперименты с участием лабораторных животных................................................................40
2.17. Иммуногистохимический анализ ...............................................................................................42
2.18. Статистический анализ ................................................................................................................42
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ...................................................................................43
3.1. Значимость экспрессии NOTCH1 для прогрессии карцином легкого и толстой кишки человека ..................................................................................................................................................43
3.1.1. Получение клеточных сублиний с подавленной экспрессией NOTCH1 ...............................43
3.1.2. Влияние подавления экспрессии NOTCH1 на клеточный фенотип и морфологию .............44
3
3.1.3. Влияние подавления экспрессии NOTCH1 на поддержание пула и фенотипа опухолевых стволовых клеток ..................................................................................................................................48
3.2. Значимость экспрессии NOTCH1 для взаимодействия опухолевых и мезенхимальных клеток микроокружения .......................................................................................................................51
3.2.1. Способность первичных культур мезенхимальных клеток стимулировать опухолевый
рост .........................................................................................................................................................51
3.2.2. Notch-зависимый механизм α-SMA-позитивной дифференцировки МСКд с приобретением ими опухоль-стимулирующей способности ............................................................55
3.2.3. Роль TP53 в Notch-индуцированной α-SMA-позитивной дифференцировке МСКд с приобретением ими опухоль-стимулирующей способности ............................................................60
3.2.4. Роль TGF-β1 в α-SMA-позитивной дифференцировке МСКд ...............................................63
3.2.5. Универсальность механизма Notch-индуцированной α-SMA-позитивной дифференцировки МСКд ......................................................................................................................66
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ......................................................................................68
4.1. Значимость экспрессии NOTCH1 для прогрессии карцином легкого и толстой кишки человека ..................................................................................................................................................68
4.2. Значимость экспрессии NOTCH1 для взаимодействия опухолевых и мезенхимальных клеток микроокружения .......................................................................................................................72
ЗАКЛЮЧЕНИЕ ....................................................................................................................................78
ВЫВОДЫ ...............................................................................................................................................80
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ...............................................................................................81
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ ........................................................82
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ .....................................................................................................................84
