Введение................................................................................................................... 4
1. Обзор литературы.............................................................................................. 17
1.1. Применение ВРТ в медицине и животноводстве ............................... 17
1.2. Беременность при ВРТ .......................................................................... 21
1.3. Доимплантационное развитие эмбриона............................................. 23
1.3.1. Морфокинетические параметры развития ....................................... 24
1.3.2. Синхронность и асинхронность дробления ..................................... 25
1.3.3. Внутриклеточная масса и трофэктодерма ........................................ 27
1.3.4. Энергетический метаболизм доимплантационного эмбриона....... 30
1.4. Онтогенез и фенотип потомков, полученных с использованием ВРТ32
1.5. Эпигенетическое перепрограммирование........................................... 36
1.6. Условия культивирования эмбрионов ................................................. 40
1.6.1. Состав культуральных сред ............................................................... 41
1.6.2. Содержание кислорода и углекислого газа ...................................... 43
1.6.3. Водородный показатель (pH)............................................................. 44
1.6.4. Температура......................................................................................... 48
2. Материалы и методы......................................................................................... 53
2.1. Животные и условия содержания......................................................... 53
2.2. Экспериментальные исследования....................................................... 53
2.2.1. Подготовка самок-доноров ооцитов ................................................. 53
2.2.2. Экстракорпоральное оплодотворение (ЭКО) .................................. 54
2.2.3. Вымывание эмбрионов из репродуктивных путей самок............... 54
2.2.4. Культивирование in vitro эмбрионов ................................................ 55
2.2.5. Индукция псевдобеременности у самок-реципиенток эмбрионов 56
2.2.6. Перенос эмбрионов в воронку яйцевода .......................................... 56
2.2.7. Взвешивание потомков....................................................................... 57
2.2.8. Мониторинг спонтанной активности, потребления воды, корма,
кислорода, выделения углекислого газа и дыхательного коэффициента57
3
2.3 Методы..................................................................................................... 57
2.3.1 Time-lapse микроскопия ...................................................................... 57
2.3.2. Дифференциальное окрашивание внутриклеточной массы (ВКМ) и
трофэктодермы (ТЕ) бластоцисты .............................................................. 59
2.3.3. Иммунофлуоресцентное окрашивание эмбрионов антителами к 5-
метилцитозину (5-meC)................................................................................ 60
2.3.4. Статистический анализ....................................................................... 63
3. Результаты.......................................................................................................... 65
3.1. Время первого эмбрионального дробления ........................................ 65
3.2. Время достижения эмбрионами 4-х и 8-и клеточных стадий ........... 66
3.3. Размеры бластомеров............................................................................. 69
3.4. Синхронность и асинхронность дробления ........................................ 70
3.5. Число клеток внутриклеточной массы (ВКМ) и трофэктодермы (ТЕ)
бластоцисты................................................................................................... 72
3.6. Общее метилирование ДНК (5-meC)................................................... 74
3.7. Подсадки эмбрионов самкам-реципиентам......................................... 76
3.8. Масса потомков...................................................................................... 77
3.9. Морфофункциональные характеристики потомков........................... 79
4. Обсуждение........................................................................................................ 82
Заключение ............................................................................................................ 98
Выводы................................................................................................................. 100
Список сокращений ............................................................................................ 101
Список литературы ............................................................................................. 102
