Введение
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ БИОРАЗНООБРАЗИЕ МИКРООРГАНИЗМОВ - ИСТОЧНИК ПОЛУЧЕНИЯ ПРОДУЦЕНТОВ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ (БАВ)
1.1. Основные направления в использовании микроорганизмов и продуктов их жизнедеятельности в науке и народном хозяйстве
1.2. Особенности и преимущества микроорганизмов экстремальных условий обитания в качестве продуцентов биологически активных веществ
1.3. Сайт-специфические эндонуклеазы рестрикции (ЭР) - этимологический инструментарий молекулярной биологии
1.4. Микроорганизмы в процессах деградации и трансформации веществ 23
1.5. Антагонистическая активность микроорганизмов 25
1.6. Инсектицидная активность микроорганизмов 27
1.7. Антимикробная активность штаммов Bacillus thuringicnsis ЗО
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Источники отбора образцов для выделения микроорганизмов 33
2.2. Методы выделения и идентификации микроорганизмов 33
2.3. Условия культивирования штаммов-продуцентов БАВ 35
2.4. Определение наличия и специфичности ЭР в штаммах микроорганизмов 36
2.5. Скрининг микроорганизмов на продукцию полисахаридгидролаз 37
2.6. Геномный анализ штаммов микроорганизмов 37
2.7. Анализ профиля жирных кислот 38
2.8. Идентификация, определение инсектицидной и антимикробной активностей штаммов Bacillus thuringicnsis (Bt) 39
2.8.1. Определение инсектицидной активности штаммов Bt 39
2.8.2. Определение антимикробных свойств водорастворимых метаболитов
39 штаммов Bt
2.8.3. Определение антимикробной активности растворенных дельта-
эндотоксинов 40
2.8.4. Определение противовирусной активности штаммов Bt 41
2.8.5. Определение состава белков параспоральных включений штаммов Bt 42
2.9. Определение патогенносте штаммов микроорганизмов 42
2.10. Хранение и поддержание штаммов 42
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
ГЛАВА. 3. РАЗНООБРАЗИЕ И ФЕРМЕНТАТИВНАЯ АКТИВНОСТЬ МИКРООРГАНИЗМОВ, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ ПРИРОДНЫХ ИСТОЧНИКОВ 43 48
3.1. Разнообразие, ферментативная активность микроорганизмов, выделенных из образцов почвы, воды и осадков Долины гейзеров (Камчатка)
3.2. Разнообразие, ферментативная и антибиотичекая активность микроорганизмов аэрозолей воздуха
3.3. Психрофильные бактерии льда Антарктиды, выделение, идентификация, ферментативная активность
3.4. Разнообразие и ферментативная активность микроорганизмов, выделенных из образцов осадков глубокого бурения дна оз. Байкал
3.5. Новые виды микроорганизмов, выделенные из природных образцов 59
3.5.1. Грамотрицательные, образующие эндоспоры, бактерии рода Paenibacil-
lus, выделенные из почвы и источников Долины гейзеров 59
3.5.2. Образующая эндоспоры грамотрицательная эубактерня Brevibacilliis barguzinii sp. nov., выделенная из термального источника 68
3.5.3. Roseomonas baikalica sp. nov. - новый вид микроорганизма, выделенного из образца керна глубокого бурения дна озера Байкал 72
ГЛАВА 4. ВЫДЕЛЕНИЕ МИКРООРГАНИЗМОВ-ПРОДУЦЕНТОВ ЭНДОНУКЛЕАЗ РЕСТРИКЦИИ (ЭР) 77
4.1. Штамм Paenibacillns sp. Dg-1009 - продуцент изошизомера ЭР Psp 10091, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5-GCCNNNNNGGC -3 78
4.2. Азотофиксирующие микроорганизмы рода Rhizobium, продуценты ЭР 81
4.2.1. Идентификация штаммов, скрининг на наличие ЭР 81
4.2.2. Штамм R.leguminozarum R-69, продуцент ЭР Rle 691 83
4.2.3. Штамм R. trifolii R-63, продуцент ЭР Rtrl 84
4.2.4. Штамм R. meliloti 21, продуцент ЭР Rme21I 85
4.2.5. Штамм R. trifolii 20, продуцент ЭР Rtr20I 86
4.3. ВтеЗбП — новая сайт-специфическая ЭР II типа из штамма Bacillus megaterium 361 87
4.4. Психрофильный штамм Acinetobacter sp. ОК-103р - продуцент ЭР
Asp 1031, узнающей нуклеотидную последовательность 5- GGATCC-3 90
4.5. Штамм Klebsiellae pneumoniae 378- продуцент ЭР Крп3781 92
4.5.1. Идентификация штамма К. pneumoniae 378, определение специфичности ЭР 92
4.5.2. Селекция штамма К. pneumoniae 378 по технологически важным признакам 96
4.6. Штаммы термофильных бактерий вида Bacillus stearothermophihts - продуценты изошизомеров ЭР BstEII и BsiYI 99
4.6.1. Штаммы В. stearothermophihts Т-10 и Т-9 - продуценты изошизомера ЭР BstEII 100
4.6.2. Штамм В. stearothermophilus Т-22 - продуцент изошизомера ЭР BsiYI. 102 ГЛАВА 5. АНТИМИКРОБНАЯ И ИНСЕКТИЦИДНАЯ АКТИВНОСТИ СПОРООБРАЗУЮЩИХ БАКТЕРИЙ ВИДА BACILLUS THURINGIENSIS
5.1. Идентификация и биотестирование штаммов Bt, выделенных из аэрозолей воздуха и осадков Байкала 104
5.2. Атипичные штаммы Bt, выделенные из почвы, воды и осадков горячих источников Долины Гейзеров 107
5.2.1. Идентификация штаммов 107
5.2.2. Антимикробная активность штаммов 113
5.2.3. Противовирусная активность штаммов. 115
5.2.4. Гепотипирование штаммов 116
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 118
ВЫВОДЫ 125
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 127
ПРИЛОЖЕНИЕ 1 141
ПРИЛОЖЕНИЕ 2 146
