Введение
1. Цитомегаловирус человека: структура и репликация.
1.1. Структура и организация генома 9
1.2. Репликация цитомегаловируса 11
2. Методы лабораторной диагностики цитомегаловирусной инфекции .
2.1. Культуральные методы 22
2.2. Непосредственное определение вирусных антигенов в клинических образцах 24
2.3. Определение нуклеиновых кислот вируса 26
2.4. Серологические методы 28
3. Действие цитомегаловируса на программированную клеточную гибель.
3.1. Ингибирование апоптоза в ЦМВ инфицированных клетках. 30
3.2. Влияние вирусных белков на программированную клеточную гибель. 32
3.3. Анализ клеточных факторов, участвующих в апоптозе. 41
4. Материалы и методы
4.1 Основные реактивы и препараты, используемые в работе 48
4.2 Культура клеток и вирус 48
4.3 Определение инфекционной активности вируса 49
4.4 Синхронизация ФЛЭЧ 49
4.5 Иммуноцитохимический метод 50
4.6 Определение целостности цитоплазматической мембраны фибробластов 51
4.7 Выявление активированной каспазы-3 и фрагментированной ДНК 51
4.8 Пациенты 52
4.9 Исследуемый материал 52
4.9 Быстрый культуральный метод (БКМ) 52
4.10 Твердофазный иммуноферментный анализ (тИФА) 53
4.11 Иммуноблот 53
4.12 Авидность антител 53
4.13 Полимеразная цепная реакция (ПЦР) 53
5. Выявление маркеров ЦМВ у новорожденных и детей раннего возраста.
5.1 .Повышение чувствительности выявления инфеционно активного вируса с помощью БКМ. 55
5.2.Частота обнаружения маркеров ЦМВ у недоношенных и маловесных новорожденных детей с использование количественных вариантов БКМ, ПЦР и методов серодиагностики. 57
5.3. Выявление маркеров ЦМВ у детей раннего возраста. 64
5.4. Сравнение эффективности выявления ЦМВ в клинических образцах методом ПЦР и БКМ. 70
5.5. Сравнительный анализ коммерческих тест-систем, выявляющих анти-ЦМВ антитела IgG и IgM. 73
6. Влияние ЦМВИ на гибель диплоидных фибробластов человека.
6.1. Динамика гибели фибробластов человека, инфицированных в различных фазах клеточного цикла. 77
6.2. Экспрессия мРНК генов Bcl-2, Fas и белка Вс1-2 в клетках, инфицированных ЦМВ в различных пролиферативных состояниях. 88
6.3. Активация каспазы-3 и транслокация цитохрома С в цитоплазму зараженных клеток. 94
6.4. Влияние ЦМВ на целостность цитоскелета клетки. 100
