Введение
2. Обзор литературы 9
2.1 Место PPAR в семействе ядерных рецепторов 9
2.1.1 Место PPAR в классификации семейства ядерных рецепторов 9
2.1.2. Сходство структуры PPAR с другими ядерными рецепторами 12
2.1.3. PPAR - рецепторы жирных кислот, регулирующие метаболизм липидов и действие инсулина 15
2.2. Механизмы PPAR-опосредованной регуляции транскрипции 18
2.2.1. Транскрипционные активности PPAR 20
2.3. Регуляция активности PPAR через уровень их экспрессии 26
2.4. Участие PPAR в регуляции воспалительных процессов в ЦНС
2.4.1. Терапевтические эффекты агонистов PPAR при лечении заболеваний ЦНС 30
2.4.2. Агонисты PPAR регулируют провоспалительные сигнальные пути, участвующие в заболеваниях ЦНС 34
2.5. Астроциты-один из ключевых типов клеток, участвующих в
воспалении 38
2.5.1. Фосфолипазы Аг 41
2.5.2. Циклооксигеназы и их продукты 2.6. Участие PPAR в регуляции функций астроцитов 46
2.7. Заключение 49
3. Материалы и методы 52
3.1. Приборы 52
3.2. Реактивы и препараты 52
3.3. Выделение и культивирование первичных астроцитов крысы 56
3.4. Выделение тотальной РНК 57
3.5. Обратная транскрипция и ПЦР в реальном времени 58
3.6. Электрофорез и иммуноблотинг 59
3.7. Трансфекция плазмидой и миРНК 60
3.8. Измерение концентрации простагландина Е2 з
3.9. Измерение ДНК-связывающей активности 62
3.10. Статистический анализ 64
4. Результаты 65
4.1. Взаимосвязь PPAR 65
4.1.1. Взаимосвязь PPAR в нативных астроцитах 65
4.1.2. Влияние LPS на экспрессию PPAR а, (3, у 67
4.1.3. Влияние агонистов PPAR на экспрессию PPARa, Р, у в LPS-стимулированных астроцитах 69
4.1.4. Влияние комбинаций агонистов PPAR на экспрессию PPAR a,p\y 72
4.1.5. Розиглитазон индуцирует экспрессию PPAR(3 через PPARy-опосредованный путь 74
4.1.6. PPARa агонист GW7647 снижает экспрессию PPAR(3 76
4.1.7. L-165041 увеличивает экспрессию и активность PPARa в LPS-стимулированных астроцитах по PPAR3- опосредованному пути 78
4.1.8. Схема взаимосвязи изоформ PPAR в LPS-стимулированных астроцитах 80
4.2. Участие изоформ PPAR в регуляции экспрессии СОХ 82
4.2.1. Влияние специфических лигандов PPAR на экспрессию СОХ... 82
4.2.2. Изучение физиологической значимости росиглитазон-индуцированной экспрессии СОХ-2 89
4.2.3. Изменение экспрессии СОХ-2 при комбинированном применении PPAR агонистов 90
4.2.4. Центральная роль PPAR(3 в регуляции LPS-индуцированной экспрессии СОХ-2 92
4.3. Роль эндогенных лигандов PPAR, продуцируемых PLA2 и СОХ-2.100
4.3.1. Роль изоформ PPAR при регуляции экспрессии PLA2 100
4.3.2. Участие эндогенных лигандов PPAR в PPAR-опосредованной регуляции СОХ-2 114
5. Выводы 120
6. Список литературы
