Введение
Глава 1. Обзор литературы 11
1.1 Кариосфера в оогенезе животных 11
1.2 Типы кариосферы 12
1.2.1 Кариосфера с капсулой 13
1.2.1.1 Капсула кариосферы R. temporaria 15
1.2.2 Кариосфера без капсулы (кариосома) .18
1.2.3 Инвертированная кариосфера 19
1.2.3.1 Строение центрального тела кариосферы млекопитающих 24
1.3 Молекулярные механизмы формирования кариосферы 26
1.4 Транскрипция в кариосфере 29
1.5 Краткое описание белков, обнаруженных в центральном теле кариосферы и в капсуле кариосферы 31
1.5.1 Актин 31
1.5.2 Ламины 32
1.5.3 Теломер-связывающий белок TRF2 .33
1.5.4 Нуклеопорины .35
1.5.5 Факторы сплайсинга (SC35, малые ядерные РНП) 36
1.5.6 Фактор ремоделирования хроматина ATRX .39
1.5.7 Топоизомераза II 40
1.6 Повторяющиеся последовательности ДНК 40
1.6.1 Диспергированные повторы .40
1.6.2 Тандемные повторы .42
Глава 2. Материалы и методы 44
2.1 Животные 44
2.2 Выделение и очистка рекомбинантного белка udTRF2 .44
2.3 Получение поликлональных антител .45
2.4 Электрофорез в SDS-ПААГ и иммуноблоттинг .45
2.5 Культуры клеток 46
2.6 Иммуноцитохимия, совмещенная с флуоресцентной гибридизацией in situ (иммуно-FISH) 46
2.7 Выделение ооцитов мыши 47
2.8 Выделение ядер ооцитов лягушек 47
2.9 Иммуноцитохимия 48
2.10 Обработка цитохалазином D 49
2.11 Выявление F-актина с помощью TRITC-фаллоидина 49
2.12 Микроинъекции BrUTP 49
2.13 Выделение хроматин-ассоциированной фракции РНК и синтез кДНК 50
2.14 ДНК-РНК FISH 51
2.15 Секвенирование и биоинформатический анализ .52
Глава 3. Результаты 54
3.1 Получение антител к udTRF2-домену теломер-связывающего белка TRF2 54
3.2 Белки экстрахромосомных компонентов кариосферы 57
3.1.1 Ламины и TRF2 в составе центрального тела ооцитов мыши 57
3.1.2 Структурные компоненты капсулы кариосферы R. temporaria 62
3.3 Транскрипция в поздних ооцитах R. temporaria 75
3.4 РНК ядра ооцитов R. temporaria 77
Глава 4. Обсуждение 85
4.1 Молекулярный состав и функции экстрахромосомных компонентов кариосферы .85
4.2 Транскрипция и состав РНК в ядрах поздних ооцитов .92
Выводы 98
Список литературы 99
Благодарности .115
