Введение
Обзор литературы 10
Глава 1. Обзор методов количественной диагностики антител к коклюшу, дифтерии и столбняку 10
1.1. Реакция нейтрализации токсинов in vivo 10
1.2 Реакция нейтрализации токсинов in vitro 11
1.3. Иммуноферментный анализ 12
1.4. Агглютинационные тесты 14
Глава 2. Современные подходы к твердофазному дот-иммуноанализу 15
2.1. Улеродные наночастицы в иммунодиагностике 15
2.2. Подходы к оценке результатов анализа 18
2.3. Диагностические тест-системы, предназначенные для детекции нескольких аналитов и особенности их конструирования 20
Материалы и методы исследования 22
Глава 3. Материалы 22
Глава 4. Методы 23
4.1.Количественное определение антител к коклюшу, дифтерии и столбняку в сыворотках крови 23
4.2. Оценка гомогенности белковых препаратов, использовавшихся в работе 23
4.3. Синтез углеродного диагностикума 23
4.4.Измерение обратного динамического светорассеяния 25
4.5. Измерение интенсивности диагностического сигнала в твердофазном анализе 25
4.6. Статистическая обработка данных 26
Результаты исследований и их обсуждение 27
Глава 5. Концепция и формат иммуноанализа, твердофазный реагент, диагностические пороги теста 27
Глава 6. Характеристика реагентов, использовавшихся при конструировании тест-системы 35
Глава 7. Оптимизация процедуры оценки результатов анализа 37
7.1. Воспроизводимость измерений интенсивности сигнала 37
7.2. Подбор фактора коррекции гаммы изображения 39
Глава 8. Оптимизация процедуры анализа 42
8.1. Подбор оптимальной концентрации диагностического реагента 42
8.2. Подбор режима блокирования неспецифических взаимодействий 46
8.3. Подбор оптимальных концентраций анти-лигандов и длительности инкубации с сыворотками крови 50
8.4. Оптимизация условий детекции противококлюшных антител 51
8.5. Подбор оптимальных условий детекции столбнячных и дифтерийных антител 54
Глава 9. Определение аналитических характеристик тест-системы 57
9.1. Воспроизводимость детекции антител к коклюшу, дифтерии и столбняку, профиль точности анализа 57
9.2. Параллелизм 60
Глава 10. Исследование сывороток крови при помощи референсных тест-систем
10.1. Содержание антител к коклюшу у детей различных возрастных групп 63
10.2. Содержание дифтерийного и столбнячного антитоксинов у детей 66
Глава 11. Апробация сконструированной дот-иммуноаналитической тест системы 67
Заключение 73
Выводы 79
Список принятых сокращений 80
Список литературы 81
