Введение
1 Обзор литературы 8
1. Общие представления об актиношх микроштаментах и их функциях в метке 8
2. Структура и свойства мономера актина 10
3. Структура и свойства р -актива 12
4. Полимеризация актина 19
4.1. Значение полимеризации и общая характеристика реакции 19
4.2. Стадии полимеризащш актина 20
4.3. Влияние цитохалазинов и фаллоидина на полимеризацию актина 37
5. Взаимодействующие с актином белки ншлішшх kietok 41
5.1. Белки, взаимодействующие с G-актином и ингиби-рующие его полимеризацию 41
5.2. Белки, сшивающие актиновые филаменты между собой 45
5.3. Белки, укорачивающие актиновые филаменты 50
5.4. Возможные биологические функции актин-связывающих белков 60
5.5. Направления дальнейших исследований биохимии актин-связывающих белков 68
2 Материалы и методы 71
1. Материалы 71
2. Методы 72
2.1. Получение ацетонового порошка из скелетных мышц кролика 72
2.2. Получение актина 73
2.3. Получение тубулина 75
2.4. Получение экстракта мозга для аффинной хроматографии и для получения фактора, понижающего вязкость актина 77
2.5. Иммобилизация актина на сефарозе, активированной Вгси 78
2.6. Подготовка ионообменников 78
2.7. Определение кажущейся вязкости актина с помощью вискозиметра с падающим шариком 79
2.8. Определение удельной активности фактора, понижающего вязкость актина 80
2.9. Определение ДНКазной активности 81
2.10. Определение полимеризации актина оптическим методом 81
2.11. Аналитическое ультрацентрифугирование 81
2.12. Электронная микроскопия 81
2.13. Электрофорез в полиакриламидном геле 82
2.14. Получение одномерных пептидных карт 84
2.15. Определение концентрации белка 85
2.16. Перевивка асцитной карциномы Эрлиха и получение экстракта клеток карциномы 85
3. Исследование влияния белков экстракта мозга на состояние актина 86
1.1. Отсутствие у экстракта мозга способности образовывать актиновый гель 86
1.2. Обнаружение в экстракте мозга белка, понижающего вязкость актина 88
4. Ввделение актин-связыващих белков мозга методом аффинной хроматографии и исследование их активности 90
2.1. Тубулин - основной актин-связывающий белок мозга 90
2.2. Тубулин не обладает способностью понижать вязкость F -актина 97
2.3. Влияние тубулина на седиментационные свойства актина 105
2.4. Выделение белкового фактора, ответственного за понижение вязкости актина экстрактом мозга 111
2.5. Фактор, понижающий вязкость актина, представляет собой комплекс актина и белка с молекулярным весом 90 кД 124
5. Исследование механизма действия комшіжса актина и белка с молекулярным весом 90 кД 138
3.1. Понижение вязкости актина комплексом обусловлено уменьшением длины актиновых филаментов 138
3.2. Комплекс из мозга ингибирует элонгацию актиновых филаментов на предпочтительном для полимеризации конце 147
3.3. Влияние ионов Са на активность белкового комплекса из мозга 151
3.4. Комплекс из мозга отличается по механизму действия от цитохалазина D - он способен укорачивать актиновые филаменты, стабилизированные фаллоидином и тропомиозином 156
Обсуждение результатов 164
Выводы 186
