Введение
Глава 1. Обзор литературы 13
1.1 Бактерии рода Azospirillum как объект исследования 13
1.2 Роль белковых структур бактериальной поверхности в установлении растительно-микробных ассоциаций 17
1.2.1 Строение бактериальных жгутиков 18
1.2.2 Особенности жгутикования азоспирилл 21
1.2.3 Бактериальные флагеллины в качестве элиситоров, индуцирующих защитные реакции растений 23
1.2.4 Разнообразие бактериальных пилей 27
1.2.5 Пилеподобные структуры азоспирил 33
1.3 Изменения бактериальной поверхности азоспирилл под влиянием различных стимулов 34
1.4 Биоинформатический анализ в биологических исследованиях 36
Глава 2. Материалы и методы 43
2.1 Бактериальные штаммы и условия культивирования микроорганизмов 43
2.2 Иммунизация животных и получение антител 43
2.2.1 Иммунизация животных целыми бактериальными клетками A. brasilense SK048 43
2.2.2 Иммунизация животных мономерами флагеллина полярного жгутика A. brasilense Sp245 44
2.2.3 Получение антител 44
2.2.4 Использованные антитела 45
2.3 Реакция агглютинации 45
2.4 Препараты наружных мембран бактериальных клеток 46
2.5 Двойная иммунодиффузия 46
2.6 Линейный иммуноэлектрофорез 47
2.7 Денатурирующий электрофорез в полиакриламидном геле и иммуноблотинг 47
2.8 Дот-анализ 48
2.9 Получение коньюгатов антител с коллоидным золотом 48
2.10 Изучение особенностей фронта распространения азоспирилл в среде, содержащей витальный краситель конго красный и ИК-спектроскопия препаратов наружных бактериальных мембран 49
2.11 Контрастирование бактериальных препаратов 49
2.12 Иммуноэлектронная микроскопия 50
2.13 Выделение флагеллина полярного жгутика 50
2.14 Обработка растений препаратом флагеллина полярного жгутика 51
2.15 Определение митотического индекса меристематических клеток 52
2.16 Статистическая обработка результатов 52
2.17 Молекулярное моделирование по шаблону 53
Глава 3. Полученные результаты и обсуждение 54
3.1 Исследование поверхностных белковых антигенов бактерий Azospirillum brasilense 54
3.1.1 Выявление детерминант флагеллина очехленного жгутика A.brasilense Sp245 54
3.1.2 Получение и анализ антител на флагеллин A. brasilense Sp245 57
3.1.2.1 Получение мономеров флагеллина из филаментов полярного жгутика штамма A. brasilense Sp245 58
3.1.2.2 Серологический анализ флагеллина A. brasilense Sp245 62
3.1.3 Выявление белковых пилей у A. brasilense Sp245 и мутантного штамма A. brasilense SK048 64
3.1.4 Выявление фибриллярных структур на поверхности A. brasilense SK048 с помощью негативного контрастирования 68
3.1.5 Получение и анализ антител на клетки Gri+ мутанта A. brasilense SK048 70
3.2 Анализ изменений клеточной поверхности и структуры макроколоний бактерий Azospirillum brasilense под влиянием конго красного 73
3.3 Оценка влияния флагеллина A. brasilense Sp245 на митотическую активность растительных апикальных меристем 81
3.4 Биоинформатический анализ 3D структур флагеллина и пилиноподобных белков с использованием результатов полногеномного секвенирования ДНК штамма A. brasilense Sp245 84
Заключение 96
Выводы 99
Список использованных источников 100
