Введение
CLASS 1. Обзор литературы 1 CLASS 0
1.1 Общая характеристика флавивирусов 10
1.1.1 Общий план строения и трансляции генома флавивирусов 13
1.1.1.2 Структура генома 13
1.1.1.3 Репликация РНК 15
1.1.1.4 Трансляция и процессинг 16
1.1.1.5 Стратегия вирусного генома 19
1.1.2 Белки флавивирусов и их функции 20
1.1.2.1 Структурные белки флавивирусов 20
1.1.2.2 Неструктурные белки флавивирусов 25
1.2 Филогения различных изолятов вируса Западного Нила 34
1.3 Исследования ВЗН, проведенные в лаборатории Молекулярной генетики института Вирусологии РАМН 36
1.4 Этиология и эпидемиология 44
1.5 Клиника заболевания 52
1.6 Резервуар вируса среди позвоночных 53
1.7 Переносчики вирусной инфекции 54
1.8 Сохранение вирусной популяции в межэпизоотический период 58
1.9 Ареал распространения заболевания за рубежом 59
1.10 Ареал распространения заболевания в России и странах СНГ 61
2. Материалы и методы 64
2.1 Место сбора и объем полевого материала 64
2.2 Методы сбора, транспортировки, хранения и подготовки полевых материалов 67
2.3 Методы молекулярно-биологических исследований 67
2.3.1. Выделение тотальной РНК из осветленной клеточной или тканевой суспензии 67
2.3.2 Реакция обратной транскрипции 67
2.3.3 Проведение полимеразной цепной реакции 68
2.3.4. Электрофорез ДНК 70
2.3.5. Секвенирование ДНК 71
2.4 Компьютерная обработка данных 71
3. Собственные исследования 71
3.1.Определение полноразмерных нуклеотидных последовательностей геномов штаммов вируса ЗН LEIV-AstOO-986- human и LEIV-Vlg99-27889-human 71
3.2. Создание ОТ-ПЦР тест системы для обнаружения РНК вируса ЛЗН в клинических образцах и пробах полевого материала 77
3.3 Определение специфичности и чувствительности ОТ-ПЦР тест - системы, лабораторная модификация системы 78
3.4 Исследование комаров и клещей Астраханской области на наличие вируса ЗН при помощи ОТ-ПЦР системы 88
3.4.1. Анализ зараженности видового состава комаров 89
3.5. Нуклеотидный и филогенетический анализ 5-концевой области генома вируса ЗН из полевых изолятов 93
3.6. Обсуждение 96
Выводы 98
