Введение
1. Инициация транскрипции рнк-полимеразой п у эукариот 5
1.1 РНК-полимераза П 5
1.2 Локусы контроля транскрипции генов класса II 6
1.3 Базальная транскрипция. Общие факторы транскрипции 10
1.4 Специфические факторы транскрипции: активаторы и репрессоры 14
1.5 Корегуляторы 15
2. Хроматин 18
2.1 Структура хроматина. Модификации гистонов 18
2.2 Структурные и биохимические особенности гетерохроматина 23
2.3 Гетерохроматин и транскрипция. Эффект положения гена 26
2.4 Белковые комплексы, изменяющие структуру хроматина 31
3. Ядерные рецепторы 41
3.1 Строение и механизмы действия ядерных рецепторов 41
3.2 Ядерные рецепторы и гормональная сигнализация у D. melanogaster 46
3.3 Корегуляторы ядерных рецепторов 55
2 Материалы и методы 62
1. Материалы 62
1.1 Штаммы и вектора S. cerevisiae и Е. coli, использованные в работе 62
1.2 Библиотека кДНК 62
1.3 Дрожжевые и бактериальные среды 62
1.4 Ферменты и реактивы 63
1.5Праймеры 63
1.6 Конструкции для анализа активации репортерных генов в дрожжах 64
1.7 Конструкции pBait для двухгибридного анализа 64
1.8 Конструкция для экспрессии фрагмента белка Нг46 для получения поликлональных антител 65
1.9 Конструкции для анализа функций доменов белка SAYP in vivo 65
2. Методы 65
2.1 Работа с дрожжами. Скрининг библиотеки кДНК в двухгибридной системе 65
2.2 Работа с ДНК 70
2.3 Работа с белками 74
2.4 Работа с D. melanogaster 78
2.5 Использованное программное обеспечение 80
3 Результаты 81
1. Изучение роли SAY-домена белка SAYP в активации транскрипции в дрожжах 81
2. Изучение влияния белка SAYP на транскрипцию в гетерохроматине 83
3. Изучение влияния SAY-домена белка SAYP на выживаемости и активацию транскрипции и vivo 85
4. Изучение роли PHD-доменов белка SAYP в репрессии транскрипции в гетерохроматине 88
5. Поиск белков, взаимодействующих с SAYP в двухгибридной системе 88
6. Подтверждение взаимодействия SAYP и Hr46(DHR3) 91
Обсуждение результатов 94
Выводы 104
