Введение
1. Обзор литературы 8
1.1. Плазмиды Bacillus subtilis и других видов бацилл 8
1.1.1. Общая характеристика бациллярных плазмид 8
1.1.2. Свойства, определяемые генами мелких плазмид бацилл 9
1.1.3. Свойства, определяемые генами крупных плазмид бацилл 13
1.1.4. Репликация плазмид 17
1.1.4.1 Репликация по механизму катящегося кольца 17
1.1.4.2. Тета-тип репликации 18
1.2. Бактериальная конъюгация 24
1.2.1. Механизмы конъюгационных процессов у грамотрицательных микроорганизмов на примере F-фактора E.coli 24
1.2.2. Конъюгация у грамположительных микроорганизмов 28
1.2.2.1. Механизмы конъюгации у грамположительных бактерий 28
1.2.2.1.1. Структуры, вовлекаемые в процесс конъюгации 28
1.2.2.1.2. Сходство элементов конъюгативного аппарата с компонентами системы секреции IV типа 31
1.2.2.2. Конъюгативная мобилизация RCR плазмид 35
1.2.2.3. Конъюгативные транспозоны 37
1.2.2.4. Конъюгация у бацилл 39
1.2.2.4.1. Группа В. cereus 39
1.2.2.4.2. Группа В. subtilis 42
1.2.2.5. Конъюгация у других грамположительных микроорганизмов 44
1.2.2.5.1. Конъюгативиый перенос с участием плазмид широкого круга хозяев. Конъюгация у стафилококков, лактококков и других грамположительных микроорганизмов 44
1.2.2.5.2. Феромонзависимая конъюгация у энтерококков 46
1.2.2.5.3. Конъюгация у стрептомицетов 48
2. Материалы и методы 52
3. Результаты 60
3.1. Поиск и характеристика крупных природных плазмид в штаммах Bacillus subtilis, выделенных из почв Москвы и Московской области 60
3.1.1. Поиск крупных плазмид в штаммах B.subtilis .60
3.1.2. Сравнение обнаруженных крупных плазмид с минирепликоном плазмиды р19 из белорусской коллекции B.subtilis 66
3.1.3. Определение способности крупной плазмиды из штамма B.subtilis 1440 к мобилизационному переносу 66
3.2. Изучение конъюгативных способностей крупной плазмиды из почвенного штамма B.subtilis 19 67
3.2.1. Мобилизация мелких неконъюгативных плазмид 67
3.2.1.1. Изучение особенностей мобилизации pUBl 10 67
3.2.1.1.1. Определяющая роль р19 в мобилизации pUBllO 68
3.2.1.1.2. Изучение влияния протеиназы К на мобилизацию pUBllO 69
3.2.1.1.3. Кинетика переноса pUBllO при разных температурах 71
3.2.1.1.4. Мобилизационный перенос pUBllO при использовании различных штаммов B.subtilis 72
3.2.1.1.5. Перенос pUBllO в штаммы разных видов Bacillus 72
3.2.1.2. Мобилизация других неконъюгативных плазмид 73
3.2.1.2.1. Изучение переноса плазмид с сигма-типом репликации (рВСІб,
рС194) 74
3.2.1.2.2. Изучение переноса плазмиды, имеющей тета-репликон 74
3.2.2. Изучение конъюгативного переноса собственно крупной плазмиды р19 78
3.2.2.1. Маркирование крупной криптической плазмиды р19 78
3.2.2.2. Частота конъюгативного переноса плазмиды pl9cat 81
3.2.2.3. Коныогативный перенос pl9cat при разных соотношениях донора и реципиента 83
3.2.2.4. Кинетика конъюгативного переноса pl9cat 83
3.2.2.5. Особенности переноса р19 при использовании в качестве партнеров при конъюгации различных штаммов B.subtilis ...85
3.2.3. Анализ мутантов р19 с нарушенной способностью к конъюгации...87
3.2.3.1. Клонирование в клетках E.coli фрагментов р19, обуславливающих способность плазмиды к конъюгационному переносу 87
3.2.3.2. Идентификация фрагмента ДНК, соответствующего рЗ-102, в клонотеке фрагментов ДНК р19 89
3.2.3.3. Определение нуклеотидной последовательности фрагмента ДНК р19 и ее анализ 91
4. Обсуждение результатов 94
Выводы 102
Список литературы
