Введение
Глава 1. Литературный обзор 18
1.1. Подходы к получению ПСК 18
1.2. Методы получения ИПСК 21
1.3. Практические подходы к подтверждению плюрипотентного статуса ИПСК 23
1.4. Молекулярные механизмы индукции плюрипотентности 25
1.5. Дифференцировка в нейральном направлении 31
1.6. Нейрогенез во взрослом организме 32
1.7. Дифференцировка ПСК в нейральном направлении в 2D-условиях 35
1.8. Получение нейральных 3D органоидов 37
1.9. Общие сведения о болезни Альцгеймера 41
1.10. Бета-амилоидная гипотеза возникновения БА 42
1.11. Роль тау-белка в развитии БА 45
1.12. Генетические факторы риска возникновения БА 47
1.13. Общие сведения о синдроме Дауна 49
1.14. Синдром Дауна и болезнь Альцгеймера 50
1.15. Существующие клеточные модели синдрома Дауна и болезни Альцгеймера 51
Глава 2. Материалы и методы 55
2.1. Реагенты и материалы исследования 55
2.2. Получение ИПСК 59
2.3. Дифференцировка ИПСК в нейральном направлении 60
2.4. Получение нейральных органоидов из ИПСК 61
2.5. Выделение тотальной РНК 62
2.6. Обратная транскрипция 63
2.7. ПЦР в реальном времени 65
2.8. Определение оптимального набора генов для нормировки результатов ПЦР в реальном времени 67
2.9. Иммуноферментный анализ 68
2.10. Окраска антителами 68
2.11. Определение апоптотирующих клеток методом TUNEL 70
2.12. Приготовление гистологических срезов органоидов 71
2.13. Измерение электрофизиологической активности нейронов методом «патч-кламп» 72
2.14. Вестерн-блот 73
2.15. Спонтанная дифференцировка ИПСК 74
Глава 3. Результаты 75
3.1. Получение ИПСК из клеток амниотической жидкости 75
3.2. Дифференцировка ИПСК в нейральном направлении в 2D условиях 85
3.3. Определение признаков патологических процессов БА в нейральных клетках 91
3.4. Определение генов, подходящих для нормировки результатов ПЦР в реальном времени 95
3.5. Получение нейральных 3D органоидов из ИПСК 102
3.6. Определение признаков патологических процессов БА в нейральных органоидах 106
Глава 4. Обсуждение результатов 110
Выводы 120
Список литературы 121
