Введение
Глава 1. Обзор литературы 13
1.1. Основы молекулярно-генетического метода определения Т- и В-клеточной клональности 15
1.1.1. Строение Т-клеточных рецепторов, молекул иммуноглобулинов и их генов. Перестройка генов Т-клеточных рецепторов и генов тяжелых и легких цепей иммуноглобулинов. Т- и В-клеточный иммунный ответ; популяции Т-и В-лимфоцитов 15
1.1.2. Основные принципы определения Т- и В-клеточной клональности. Полимеразная цепная реакция и фрагментный анализ 21
1.2. Показания к определению клональности Т- и В-лимфоцитов и сложности при интерпретации полученных данных 24
1.2.1. Определение принадлежности опухоли к T- или В-клеточной линии дифференцировки. Одновременное выявление Т- и В-клеточной клональности 25
1.2.2. Контроль заболевания на разных этапах терапии, оценка минимальной остаточной болезни. Стадирование при диагностике. Клональная вариабельность и гетерогенность 28
1.2.3. Проведение дифференциальной диагностики опухолевой и реактивной лимфопролиферации 34
Глава 2. Материалы и методы 39
2.1. Дизайн исследования 39
2.2. Пациенты и группы контроля 42
2.3. Выделение клеток и ДНК из крови, костного мозга, материала биоптатов и парафиновых блоков 46
2.4. Анализ Т- и В-клеточной клональности по реаранжировкам генов Т 3 клеточных рецепторов и иммуноглобулинов 47
2.4.1. Критерии интерпретации результатов 48
2.4.2. Условия ПЦР (полимеразной цепной реакции 49
2.4.3. Очистка продуктов амплификации и фрагментный анализ амплификатов 50
2.4.4. Чувствительность метода 51
2.5. Агарозный гель-электрофорез и секвенирование клональных продуктов 51
2.6. Подбор и тестирование пациент-специфичного праймера 52
2.7. Построение стандартной кривой, определение общей и подсчетной чувствительности метода определения минимальной остаточной болезни 54
2.8. Количественная оценка минимальной остаточной болезни при помощи ПЦР в реальном времени 56
2.9. Селекция популяций лимфоцитов периферической крови 57
2.10. Статистическая обработка результатов 57
Глава 3. Результаты и обсуждение 58
3.1. Одновременное выявление Т- и В-клеточной клональности 58
3.1.1. Частота и характер клональных реаранжировок генов TCR и IG у пациентов с острым лимфобластным лейкозом 60
3.1.2. Одновременное выявление Т- и В-клеточной клональности у пациентов с ангиоиммунобластной Т-клеточной лимфомой 63
3.1.3. Сочетанное выявление Т- и В-клеточной клональности при аутоиммунной гемолитической анемии 64
3.1.4. Композитные лимфомы 65
Заключение по главе 3.1. 67
3.2. Использование клональных перестроек генов TCR и IG для подбора пациент-специфичных праймеров и контроля минимальной остаточной болезни и клональная эволюция у пациентов с острым лимфобластным лейкозом 68
Заключение по главе 3.2. 76
3.3. Клональная вариабельность и гетерогенность 76
3.3.1. Гетерогенность и вариабельность Т-клеточных клонов у пациентов с ангиоиммунобластной Т-клеточной лимфомой 76
3.3.2. Смена клональных перестроек генов Т-клеточного рецептора у пациентов после выполнения аллогенной трансплантации стволовых кроветворных клеток 81
Заключение по главе 3.3. 84
3.4. Дифференциальная диагностика реактивной и опухолевой лимфопролиферации 84
3.4.1. Персистенция CD8+ лимфоцитов у пациентов с аутоиммунной гемолитической анемией 84
3.4.2. Т- и В-клеточная клональность при негематологических аутоиммунных заболеваниях и у здоровых доноров/добровольцев 95
Заключение по главе 3.4. 98
Заключение 99
Выводы 103
Практические рекомендации 104
Список литературы 105
Приложение 139
