Введение
1. Обзор литературы 10
1.1. Общая характеристика NK-клеток 10
1.2. Литические гранулы 12
1.3. Рецепторы NK-клеток 14
1.4. Дифференцировка и обучение NK-клеток 20
1.5. Активация NK-клеток и иммунологический синапс (ИС) 23
1.6. Механизмы цитолитического действия NK-клеток 28
1.7. Первичные иммунодефициты, сопровождающиеся нарушением активации и дегрануляции NK-клеток 31
1.8. Хроническая гранулематозная болезнь 36
1.9. Инфекция, вызываемая вирусами простого герпеса 38
1.10. Методы исследования дегрануляции NK-клеток 45
1.11. Резюме по обзору литературы 46
2. Материалы и методы 48
2.1. Характеристика обследованных групп 48
2.2. Реактивы, расходные материалы и оборудование 50
2.3. Забор крови и выделение мононуклеарных клеток 52
2.4. Культивирование клеток K562 53
2.5. Определение дегрануляции NK-клеток по экстернализации CD107a 53
2.6. Определение NK-активности МНК 55
2.7. Внутриклеточная окраска на CD107a и перфорин 56
2.8. Сочетанный анализ дегрануляции и внутриклеточной экспрессии перфорина и гранзима A 57
2.9. Статистическая обработка результатов 58
3. Результаты 59
3.1. Отработка условий теста на экстернализацию CD107a 59
3.2. Валидация CD107a как маркера дегрануляции NK-клеток 65
3.3. CD63 как маркер дегрануляции NK-клеток 75
3.4. Определение совокупности методов для исследования NK-клеток. Нормативные показатели 78
3.5. Показатели функционального состояния NK-клеток у лиц пожилого возраста 80
3.6. Показатели функционального состояния NK-клеток при первичных иммунодефицитах 85
3.7. Показатели функционального состояния NK-клеток при часто рецидивирующем герпесе 96
3.8. Фенотип дегранулирующих NK-клеток 101
3.9. Сопоставление дегрануляции с другими признаками активации NK-клеток 106
4. Обсуждение 108
4.1. Методологические аспекты 108
4.2. Гетерогенность NK-клеток в тесте на дегрануляцию 109
4.3. Изменения функциональных показателей NK-клеток при исследованных заболеваниях и состояниях 111
4.4. Заключение 118
5. Выводы 119
6. Благодарность 120
7. Список литературы 121
Приложение 134
