Введение
1. Обзор литературы 11
1.1. Общие сведения о вирусном гепатите С 11
1.2. Молекулярная биология вируса гепатита С
1.2.1. Структура вириона 14
1.2.2. Структура генома ВГС 14
1.2.3. Белки ВГС 15
1.2.4. Жизненный цикл ВГС 17
1.3. Терапия ВГС-инфекции 19
1.4. Перспективы создания противовирусных препаратов на основе малых интерферирующих РНК 22
1.5. Липосомальные системы доставки нуклеиновых кислот 26
1.5.1. Компоненты липосом 27
1.5.2. Механизм липид-опосредованной трансфекции 37
1.5.3. Дизайн липосом с адресной доставкой инкапсулированных веществ 41
2. Материалы и методы 47
2.1. Клеточные культуры 47
2.2. Нуклеиновые кислоты 48
2.3. Оценка активности миРНК 48
2.4. Синтез алифатических производных пептидов 49
2.5. Критический параметр упаковки (КПУ) 54
2.6. Температура фазового перехода 55
2.7. Критическая концентрация везикулообразования 55
2.8. Приготовление липосом 55
2.9. Диаметр частиц
2.10. Стабильность 56
2.11. Электрофорез 56
2.12. Электронная микроскопия 56
2.13. Анализ цитотоксичности (МТТ тест) 56
2.14. Трансфекция плазмидной ДНК 57
2.15. Учет количества трансфецированных клеток 58
2.16. Оценка специфической активности препаратов миРНК 58
2.17. Люциферазный тест 59
2.18. Конфокальная микроскопия 59
2.19. Флуорофорные метки 59
2.20. Животные 60
2.21. Исследование острой токсичности 61
2.22. Фармакокинетические исследования 61
2.23. Построение калибровочного графика 61
2.24. Анализ данных 61
3. Результаты работы 62
3.1. Выбор оптимальной молекулы миРНК для подавления репликации вируса гепатита С в клетках 62
3.2. Синтез алифатических производных пептидов 69
3.3. Исследование свойств агрегатов, формируемых полученными соединениями в водной среде 73
3.4. Исследование свойств комплексов нуклеиновых кислот с липосомами 79
3.5. Исследование токсичности липосом на основе OrnOrnGlu(С16)2 in vivo 84
3.6. Оценка специфической активности разработанного препарата
3.7. Модификация липосомальной поверхности углеводами для повышения эффективности направленной доставки миРНК в печень 86
3.8. Изучение фармакокинетики модифицированных углеводами липосом в сравнении с немодифицированными
3.8.1. Введение флуорофорных меток в состав комплекса 88
3.8.2. Проведение фармакокинетических исследований 90
4. Обсуждение 95
Заключение 108
Выводы 110
Благодарности 111
Список сокращений 112
Список литературы 113
