Введение
3. Обзор литературы 11
3.1. Вирус иммунодефицита человека первого типа 11
3.2. Феномен широкой нейтрализации 13
3.2.1. Регион связывания с CD4 16
3.2.2. MPER регион gp41 19
3.2.3. Вершина тримера gp120 20
3.2.4. Регион петли V3 23
3.2.5. Стык gp120/gp41 25
3.3. Разработка вакцин, индуцирующих широконейтрализующие антитела 30
3.3.1. Первые иммуногены и гуморальный иммунный ответ 30
3.3.2. В-клеточные иммуногены, вызывающие наработку широконейтрализующих антител 31
3.3.2.1. Пептидные иммуногены 32
3.3.2.2. Иммуногены-скафолды 33
3.3.2.3. Доменные иммуногены 34
3.3.2.4. Иммуногены на основе кора gp120 35
3.3.2.5. Мономерный gp 120 36
3.3.2.6. Ненативные env-тримеры 36
3.3.2.7. Нативно-подобные тримеры Env 38
3.3.2.8. Искуственные полиэпитопные иммуногены 39
3.4. Феномен псевдотипирования и системы оценки вируснейтрализации 42
3.4.1. Феномен псевдотипирования 43
3.4.2. Лентивирусные системы 44
3.4.3. Клетки, используемые для анализа нейтрализующей активности 46
3.4.4. Панели env-псевдовирусов как доминирующая система оценки гуморального анти-ВИЧ ответа 48
4. Материалы и методы 52
4.1. Материалы 52
4.2. Методы 55
5. Результаты и их обсуждение 71
5.1. Получение и характеристика полиэпитопных ВИЧ-иммуногенов, несущих имитаторы эпитопов нейтрализующих антител широкого спектра действия 71
5.1.1. Рекомбинантные белки, несущие пептид-имитатор эпитопа, узнаваемого антителом 2F5 71
5.1.2. Рекомбинантные белки, несущие пептид-имитатор эпитопа, узнаваемого антителом 2G12 78
5.2. Конструирование и характеристика панели env-псевдотипированных вирусов ВИЧ-1 84
5.2.1. Конструирование плазмиды pcDNA3.1-env 85
5.2.2. Получение env-псевдовирусов 88
5.2.3. Определение субтипа генов env, использованных при получении псевдовирусов 92
5.2.4. Определение тропизма псевдовирусов для их характеристики 95
5.2.6. Определение оптимальной концентрации клеток для инфицирования псевдовирусами 97
5.2.7. Определение оптимальной концентрации псевдовирусов для инфицирования
5.2.8. Определение оптимальной вносимой концентрации DEAE-декстрана для усиления сигнала люминисценции 99
5.2.9. Характеристика псевдовирусов при помощи МКА 100
5.3. Оценка вируснейтрализующей активности иммуногенов, несущих пептиды-имитаторы широконейтрализующих антител 103
6. Заключение 107
7. Выводы 108
8. Благодарности 109
9. Список цитируемой литературы 110
