Введение
Литературный обзор 11
ГЛАВА 1. ДНК-регуляторные элементы Drosophila melanogaster 11
1.1. Элементы коровых промоторов, транскрибируемых РНК-полимеразой II.11
1.2. Преинициаторный комплекс на промоторах генов, транскрибируемых РНК-полимеразой II
1.3. Энхансеры 15
1.4. Сайленсеры (PRE – элементы) .18
ГЛАВА 2. Комплексы белков группы Polycomb 21
ГЛАВА 3. Белки группы Trithorax 28
ГЛАВА 4. Механизмы Polycomb-зависимой репрессии 32
ГЛАВА 5. Переключение активности PRE 39
5.1. Переключение PRE в Bithorax-комплексе 39
5.2. Переключение PRE в трансгенных моделях 42
5.3. Проходящая транскрипция и переключение PRE 50
5.4. Белковые комплексы на PRE в разных статусах 54
Материалы и методы 58
ГЛАВА 1. Генетические методы 58
1.1. Линии и мутации Drosophila melanogaster, использованные в данной работе .58
1.2. Трансформация эмбрионов Drosophila melanogaster и получение трансгенных линий .59
1.3. Фенотипический анализ экспрессии генов yellow и white в трансгенных линиях 59
1.4. Генетические скрещивания .61
ГЛАВА 2. Биохимические методы 66
2.1. Методы работы с ДНК .66
2.1.1. Определение концентрации ДНК 66
2.1.2. Спиртовое осаждение ДНК 66
2.1.3. Горизонтальный электрофорез в агарозном геле 66
2.1.4. Выделение фрагментов ДНК из геля 67
2.1.5. Выделение геномной ДНК из мух с использованием DEPC 67
2.2.Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) 67
2.2.1. ПЦР с использованием Taq ДНК-полимеразы 67
2.2.2. ПЦР в реальном времени с использованием Hot-Start Taq-ДНК-полимеразы. 2.3. Анализ активности гена -галактозидазы в мухах. 68
2.4. Иммунопреципитация хроматина на разных стадиях развития 69
2.5. Выделение РНК из взрослых мух и обратная транскрипция 72
2.6. Получение антител
2.6.1. Экспрессия и очистка антигенов 74
2.6.2. Список антител, использованных в работе 76
Результаты 78
ГЛАВА 1. Исследование стабилизации активности регуляторных элементов терминаторами транскрипции SV40 78
ГЛАВА 2. Исследование эффектов проходящей транскрипции на сайленсер bxdPRE 81
2.1. Экспериментальная система для запуска транскрипции через bxdPRE 81
2.2. Репрессионные белки остаются на bxdPRE в присутствии проходящей траснкрипции 88
2.3.Привлечение Trithorax-белков на bxdPRE в присутствии проходящей
транскрипции 95
Обсуждение 98
Заключение 103
Выводы 105
Список литературы 107
