Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 9
1.1. Сворачивание и агрегация белков .9
1.2. Структура амилоидных агрегатов и их функциональное значение 17
1.3. Кинетика амилоидообразования 23
1.4. Факторы, влияющие на амилоидную агрегацию 27
1.5. Сворачивание и агрегация апомиоглобина .31
ГЛАВА 2. Материалы и методы .39
2.1. Материалы 39
2.2. Биохимические методы
2.2.1. Экспрессия генов 40
2.2.2. Выделение и очистка белков 41
2.2.3. Белковый электрофорез
2.3. Физические методы исследования 43
2.4. Теоретические основы методов, применяемых для исследования белковой агрегации 48
2.4.1. Абсорбционная спектроскопия 48
2.4.2. Круговой дихроизм 50
2.4.3. Флуоресцентная спектроскопия .51
2.4.4. Дифракция рентгеновских лучей .53
2.4.5. Масс-спектрометрия .53
2.4.6. Электронная микроскопия .56
2.4.7. Электрофорез 56
2.4.8. Аналитическое ультрацентрифугирование 57
2.5. Методы, используемые при обсчете экспериментальных результатов 58
2.5.1. Расчет доли промежуточного и нативного состояний 58
2.5.2. Расчет погрешности экспериментально измеряемых параметров 60
Результаты и обсуждения .61
3.1. Характеристика агрегатов апомиоглобина 61
3.1.1. Экспрессия и выделение апомиоглобина и его мутантных форм .61
3.1.2. Выбор условий для исследования амилоидообразования .64
3.1.3. Характеристика агрегатов, формируемых мутантной формой апомиоглобина V10F при температуре 40С 70
3.2. Влияние аминокислотных замен в апомиоглобине на его способность к амилоидной агрегации .76
3.2.1. Исследование стабильности мутантных форм апомиоглобина 77
3.2.2. Исследование способности мутантных форм апомиоглобина формировать агрегаты .84
3.2.3. Исследование способности мутантных форм апомиоглобина формировать амилоиды 88
3.3. Определение участка апомиоглобина, образующего межмолекулярные взаимодействия в структуре амилоидов .93
3.4. Исследование кинетики амилоидной агрегации апомиоглобина
3.4.1. Стадии амилоидной агрегации апомиоглобина 100
3.4.2. Влияние аминокислотных замен на скорость амилоидной агрегации апомиоглобина .103
Заключение .109
Выводы 111
Список цитируемой литературы .
