Введение
2. Обзор литературы 8
2.1. Семейство аноктаминов 8
2.1.1. Хлорные каналы, активируемые катионами кальция 8
2.1.2. Общая характеристика семейства аноктаминов 9
2.1.3. Топология и канальные свойства аноктаминов 12
2.1.4. Свойства и локализация Ано1 14
2.1.5. Свойства и локализация Ано
2 2.2. Строение периферического вкусового анализатора млекопитающих .21
2.3. Экспрессионный анализ одиночных хемосенсорных клеток
2.3.1. Методологические подходы для экспрессионного анализа одиночных клеток .26
2.3.2. Экспрессионный анализ одиночных хемосенсорных нейронов .30
2.3.3. Экспрессионный анализ одиночных вкусовых клеток 33
3. Материалы и методы 38
3.1. Животные, используемые в работе 38
3.2. Препараты вкусовой ткани .38
3.3. Препараты обонятельного эпителия 38
3.4. Имуногистохимия на срезах языка .39
3.5. Экспрессионный анализ генов аноктаминов во вкусовых почках 40
3.6. Клонирование полноразмерной кДНК Ано1 41
3.7. Клонирование полноразмерной кДНК Ано2 .43
3.8. Химическая трансформация клеток Е.coli 44
3.9. Трансфекция клеток линии CHO
3.10. Электрофизиология .45
3.11. Выявление сплайс-вариантов Ано1 45
3.12. Выявление сплайс-вариантов Ано2 45
3.13. Экспрессионный анализ одиночных вкусовых клеток 47
3.14. Электрофорез в агарозном геле .49
3.15. Синтез рибопробы для детекции мРНК Ано1 49
3.16. Синтез рибопробы для детекции мРНК Ано2 .51
3.17. Гибридизация in situ рибопроб на срезах вкусовой ткани мыши 53
4. Результаты и обсуждение .55
4.1. Экспрессия генов анактоминов во вкусовых почках 55
4.2. Клонирование полноразмерной кДНК Ано1 56
4.3. Клонирование полноразмерной кДНК Ано2 .58
4.4. Подтверждение функциональности рекомбинантных аналогов Ано1 и Ано2 63
4.5. Локализация мРНК Ано1 и Ано2 на срезах вкусовой ткани
4.6. Локализации Ано1 и Ано2 на срезах вкусовой ткани 69
4.7. Экспрессионный анализ одиночных клеток
5. Заключение .85
6. Выводы 88
7. Список литературы
