Введение
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 8
1.1. Применение липосом в медицине и ветеринарии 8
1.1.1. Липосомы, строение, свойства 8
1.1.2. Способы получения липосом 18
1.1.3. Деструкция фосфолипидов 22
1.1.4. Применение липосомальных препаратов 26
1.2. Синдром снижения яйценоскости-76 29
1.2.1. Определение болезни, распространение, экономический ущерб 29
1.2.2. Этиология 30
1.2.3. Эпизоотология болезни 35
1.2.4. Клинические признаки 38
1.2.5. Патологоанатомические изменения 39
1.2.6. Патогенез заболевания 40
1.2.7. Диагностика болезни 42
1.2.8. Специфическая профилактика заболевания 46
1.2.9 Принципы конструирования инактивированных противовирусных вакцин 48
1.3. Пероральная вакцинация 57
2. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 79
3.1. Методы работы с вирусом 79
3.1.1. Культивирование вируса в развивающихся утиных эмбрионах 80
3.1.2. Культивирование вируса в культуре клеток фибробластов утиных эмбрионов 80
3.1.3. Инактивация вируса действием формальдегида 81
3.2. Используемые животные и эмбрионы 82
3.3. Методы получения липосом 83
3.3.1. Получение липосом с использованием ультразвука 83
3.3.1. Получение липосом с помощью инертного носителя 83
3.4. Используемые методы проведения диагностических исследований 85
3.5. Определение остаточных количеств органических растворителей (хлороформ) 86
3.6 Определение процента включения антигена ССЯ-76 в липосомы методом разрушения липосом 87
3.7. Подготовка препаратов липосом к электронномикроскопическому исследованию на ультратоккнх срезах 87
3.8. Приготовление препарата для определения размеров липосом электронномикроскопическим методом 88
3.8.1. Приготовление препаратов регидратированной субстанции липосомальной вакцины ССЯ -76 для исследования в электронном микроскопе 88
3.8.2. Подготовка препаратов липосомальной вакцины ССЯ -76 для исследования в электронном микроскопе (безводная фиксация) 89
3.8.3. Подготовка липосомальных препаратов для исследования в электронном сканирующем микроскопе 90
3.9. Определение размера частиц и ФДС сухой липосомальной вакцины
против ССЯ - 76 оптическим методом 90
3.10. Определение остаточной влажности и перскисного окисления липидов липосомального препарата 94
3.11. Статистическая обработка результатов 96
4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 98
4.1. Методы работы с вирусом ССЯ-76 98
4.1.1. Выбор метода культивирования вируса ССЯ-76 98
4.1.2. Инактивация вируса формальдегидом 101
4.2. Изучение пригодности липосомальной формы для получения вакцинных препаратов 107
4.2.1. Изучение механизма взаимодействия липосом с клетками (фагоцитоз липосом перитонеальными макрофагами) 107
4.2.2. Исследование физико-химических свойств и биологической активности липосомальной вакцины на модели имитации переваривания in vitro 113
4.2.3. Определение коэффициента включения вируса ССЯ-76 в липосомы 116
4.2.4. Разработка оптимального ингредиентного состава инактивированной вакцины против ССЯ-76 121
4.2.5. Сравнительные экспериментальные исследования стабильности коммерческой и липосомальной форм вакцины против ССЯ-76 из штамма «В8/78» 125
4.3. Разработка технологии получения липосомальной сухой вакцины 128
4.3.1. Разработка методов получения липосом 130
4.3.2. Сравнительное изучение липосомальных препаратов из различных фосфолипидов 137
4.3.3. Лиофилизация липосомального препарата 139
4.3.4. Выбор защитной среды 140
4.3.5. Интенсификация процесса лиофилизации 143
4.3.6 Принципиальная схема получения липосомальной сухой вакцины.... 144
4.4. Разработка методов контроля липосомальной инактивированной сухой вакцины против ССЯ-76 146
4.4.1. Исследование сухой субстанции липосомального препарата 146
4.4.2. Определение фосфолипидов, входящих в состав липосом 151
4.4.3. Изучение свойств препарата при хранении (биологическая активность, остаточная влажность, сыпучесть, перекисное окисление липидов) 153
4.4.4. Определение внутреннего объема липосом методом ЭПР 156
4.4.5. Определение фракционно-дисперсного состава липосомального препарата (ФДС) 167
4.4.6. Методы контроля липосомальной вакцины против ССЯ- -76 на стерильность, стабильность (реологические свойства, антигенная и иммуногенная активность) 170
4.5. Изучение токсикологии липосомальной инактивированной сухой вакцины против ССЯ-76 171
4.6. Исследование свойств инактивированной липосомальной вакцины против ССЯ-76 в лабораторных и производственных условиях 178
4.6.1. Исследование свойств липосомальной вакцины в лабораторных условиях 178
4.6.2. Проведение производственных испытаний липосомальной вакцины 184
ВЫВОДЫ 188
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 191
ПРИЛОЖЕНИЯ 214
