ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ......................................................................... 5
ВВЕДЕНИЕ ................................................................................................. 9
Актуальность темы исследования ................................................................ 9
Цель .............................................................................................................. 10
Задачи исследования ................................................................................... 10
Положения, выносимые на защиту ............................................................ 11
Научная новизна .......................................................................................... 11
Теоретическая значимость работы ............................................................. 12
Научно-практическая значимость работы ................................................. 12
Объём и структура диссертации................................................................. 13
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ............................................................ 14
1.1 Общие сведение об аллергическом рините ......................................... 14
1.2 Клеточно-молекулярные механизмы патогенеза АР .......................... 16
1.3 Роль IL-4 и IL-13 в патогенезе АР ........................................................ 20
1.3.1 Рецепторы для IL-4 и IL-13 ............................................................. 21
1.3.2 Сигнальные пути рецепторов к IL-4 и IL-13 .................................. 22
1.4 Антицитокиновая терапия, направленная против IL-4 и IL-13 .......... 25
1.4.1 Растворимые рецепторы к IL-4 ....................................................... 25
1.4.2 Моноклональные антитела к IL-4................................................... 26
1.4.3 Моноклональные антитела к IL-13 ................................................. 27
1.4.4 Моноклональные антитела против рецепторов цитокинов .......... 28
1.5 РНК-интерференция как подход к регуляции экспрессии генов ........ 30
1.6 Пептиды как носители для молекул миРНК ........................................ 34
1.7 Резюме.................................................................................................... 36
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ....................................................... 38
2.1 Питательные среды и растворы ............................................................ 38
2.2 Клеточные линии................................................................................... 38
2.3 Молекулы миРНК против мРНК гена Il4 мыши и пептид LTP .......... 38
3
2.4 Проектирование молекул миРНК против мРНК гена Il13 мыши ....... 39
2.5 Синтез и получение двуцепочечных молекул миРНК ........................ 40
2.6 Скрининг биологической активности молекул миРНК против мРНК
гена Il13 in vitro ................................................................................................... 40
2.7 Цитотоксичность комплекса siIL-4-13/LTP ......................................... 41
2.8 Биологическая активность комплекса siIL-4-13/LTP in vitro .............. 41
2.9 Выделение клеток тимуса и их трансфекция ....................................... 42
2.10 Аллерген .............................................................................................. 42
2.11 Экспериментальные животные ........................................................... 43
2.12 Экспериментальный протокол моделирования аллергического ринита
у мышей ............................................................................................................... 43
2.13 Изучение биологической активности композиции у мышей с
индуцированным АР ........................................................................................... 44
2.14 Измерение назальной гиперреактивности ......................................... 47
2.15 Оценка уровней аллерген-специфических IgE-, IgG1- и IgG2a в
сыворотке крови .................................................................................................. 47
2.16 Изменение продукции цитокинов клетками регионарных лимфоузлов
.............................................................................................................................. 47
2.17 Изменение экспрессии мРНК генов цитокинов в слизистой оболочке
носовой полости .................................................................................................. 48
2.18 Гистопатологическое исследование слизистой оболочки носовой
полости ................................................................................................................ 49
2.19 Статистический анализ данных .......................................................... 49
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ .......................................................................... 50
3.1 Результаты моделирования АР у мышей ............................................. 50
3.1.1 Изменение назальной гиперреактивности ..................................... 50
3.1.2 Уровни иммуноглобулинов в сыворотке крови ............................ 50
3.1.3 Гистологический анализ носовой полости .................................... 51
3.1.4 Экспрессия провоспалительных цитокинов в регионарных
лимфоузлах и слизистой оболочке носовой полости ..................................... 53
4
3.1.5 Влияние экспериментальной терапии кортикостероидными,
антилейкотриеновыми и антигистаминными препаратами на модель АР у
мышей ............................................................................................................... 55
3.2 Проектирование молекул миРНК против мРНК гена Il13 .................. 60
3.3 Выбор активных молекул миРНК против мРНК гена Il13 in vitro ..... 61
3.4 Комплекс молекул миРНК и пептида-носителя LTP подавляет
экспрессию генов Il4 и Il13 в клетках HEK293T и клетках тимуса ................. 62
3.5 Цитотоксичность комплекса siIL-4-13/LTP ....................................... 65
3.6 Интраназальное введение комплекса siIL-4-13/LTP уменьшает
продукцию IL-4 и IL-13 клетками лимфоузлов, уровень аллерген
специфических IgE в сыворотке крови и назальную гиперреактивность в
модели АР на мышах .......................................................................................... 65
3.7 Подавление продукции IL-4 и IL-13 комплексом миРНК и пептида LTP
уменьшает воспаление слизистой оболочки носовой полости......................... 69
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ ....................................................................... 76
4.1 Моделирование экспериментального АР у мышей ............................ 76
4.2 Биологическая активность молекул миРНК против мРНК гена Il13
мыши и обоснование состава комплекса siIL-4-13/LTP ................................... 85
4.3 Биологическая активность комплекса siIL-4-13/LTP на модели
экспериментального АР у мышей ...................................................................... 91
4.4 Предполагаемый механизм действия комплекса siIL-4-13/LTP при
экспериментальном АР у мышей ....................................................................... 96
ЗАКЛЮЧЕНИЕ ......................................................................................... 98
ВЫВОДЫ ................................................................................................ 100
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ....................................................................... 102
