Введение
2. Обзор литературы 10
2.1. Направленный транспорт наночастиц 10
2.1.1. Пассивный транспорт наночастиц — первое поколение систем направленного транспорта лекарств 10
2.1.2. Активный транспорт наночастиц — второе поколение систем направленного транспорта лекарств 14
2.1.3. Внутриклеточное нацеливание — третье поколение систем направленного транспорта лекарств 18
2.1.3.1 Пептиды, обеспечивающие проникновение в клетку 20
2.1.3.2 Нацеливание наночастиц в ядро клетки 20
2.1.3.3 Нацеливание наночастиц на митохондрии 21
2.1.3.4 Нацеливание на аппарат Гольжди и эндоплазматический ретикулум 22
2.1.3.5 Нацеливание на лизосомы/эндосомы 23
2.2. Эндоцитоз наноразмерных частиц 24
2.2.1. Параметры наночастиц, влияющие на эндоцитоз 26
2.2.1.1 Размер 27
2.2.1.2 Форма и механические свойства 28
2.2.1.3 Модификация поверхности 29
3. Результаты и обсуждение 32
3.1. Взаимодействие липосом, нагруженных липофильным пролекарством мелфалана и несущих углеводный лиганд селектинов, с эндотелиальными клетками сосудов крови 33
3.1.1. Объект исследования 38
3.1.2. Модель эндотелия сосудов опухоли, экспрессия Е-селектина 40
3.1.3. Накопление липосом клетками HUVEC 42
3.1.4. Оценка количества интернализованных и связанных с клеточной мембраной липосом 47
3.1.5. Внутриклеточное распределение липосом 49
3.1.6. Кинетика связывания и внутриклеточной разгрузки липосом 51
3.2. Изучение механизма взаимодействия с опухолевыми клетками липосом, нагруженные липофильным пролекарством метотрексата 54
3.2.1. Объект исследования 59
3.2.2 Накопление липосом опухолевыми клетками 60
3.2.3. Изучение механизма эндоцитоза липосом клеткой 63
3.2.4. Кинетика связывания и внутриклеточной разгрузки липосом: мониторинг с помощью двойного флуоресцентного мечения 64
3.2.5. Синтез флуоресцентного аналога липофильного пролекарства метотрексата 66
3.2.6. Внутриклеточное распределение липофильного пролекарства метотрексата 69
4. Экспериментальная часть 75
4.1. Материалы и реагенты 75
4.2. Методы 76
4.2.1. УФ-спектроскопия 76
4.2.2. Флуоресцентная спектроскопия 76
4.2.3. Проточная цитометрия 76
4.2.4. Конфокальная микроскопия 76
4.3. Приготовление и характеристика липосом 77
4.4. Культуры клеток 79
4.5. Экспрессия Е-селектина клетками HUVEC 79
4.6. Накопление липосом с пролекарством мелфалана клетками HUVEC 80
4.7. Оценка количества интернализованных и связанных с клеточной мембраной липосом с пролекарством мелфалана 81
4.8. Внутриклеточное распределение SiaLeX-липосом с пролекарством мелфалана 82
4.9. Кинетика связывания и внутриклеточной разгрузки SiaLeX-липосом с пролекарством мелфалана 82
4.10. Синтез флуоресцентного аналога липофильного пролекарства метотрексата 83
4.11. Экспрессия фолатного рецептора опухолевыми клетками 86
4.12. Накопление липосом с пролекарством метотрексата опухолевыми клетками 87
4.13. Кинетика связывания и внутриклеточной разгрузки липосом с пролекарством метотрексата 88
4.14. Внутриклеточное распределение липофильного пролекарства метотрексата 88
5. Выводы 90
6. Благодарности 91
7. Список литературы 92
Приложение 1 105
