Введение
ГЛАВА I. Обзор литературы 10
1. Генетический полиморфизм и способы его оценки 10
1.1. Генный (аллельный) полиморфизм 10
1.2. Картирование генов и повторяющихся последовательностей с использованием флуоресцентной гибридизации in situ 11
1.3. Хромосомный полиморфизм
1.3.1. Структурные изменения хромосомного набора 13
1.3.2. Добавочные В-хромосомы 15
1.3.3. Полиморфизм рисунков дифференциального окрашивания хромосом 16
1.4. Геномный полиморфизм 18
2. Полиморфизм льна посевного 20
2.1. Происхождение и классификация 20
2.2. Генетическое разнообразие льна посевного
2.2.1. Полиморфизм по морфологическим признакам 21
2.2.2. Полиморфизм по биохимическим признакам 22
2.2.3. Полиморфизм по молекулярным маркерам 22
2.2.4. Полиморфизм по хромосомным маркерам 24
3. Особенности анализа мелкохромосомных объектов 25
3.1. Актуальность увеличения разрешающей способности цитогенетических методов 25
3.2. Использование подходов, приводящих к увеличению длины метафазных хромосом 27
3.3. Химические особенности строения ДНК-интеркаляторов 28
3.4. Особенности применения наиболее распространенных в
цитогенетике интеркаляторов 29
ГЛАВА II. Материалы и методы 33
1. Материалы для исследования
2. Методы исследования 35
2.1. Проращивание семян 35
2.2. Предобработка корневой меристемы 35
2.3. Фиксация корневой меристемы 36
2.4. Приготовление хромосомных препаратов растений 36
2.5. Флуоресцентная гибридизация in situ с различными зондами 37
2.5.1. Предобработка хромосомных препаратов перед FISH 37
2.5.2. Флуоресцентная гибридизация in situ 37
2.5.2.1. Мечение зондов 37
2.5.2.1.1. Рибосомные гены 37
2.5.2.1.2. CesA гены 38
2.5.2.1.3. Теломерный повтор 38
2.5.2.2. Гибридизация in situ 39
2.5.2.2.1. Денатурация хромосомных препаратов 39
2.5.2.2.2. Денатурация зондов 39
2.5.2.3. Отмывка препаратов и детекция сайтов гибридизации 40
2.6. Окрашивание хромосом 41
2.7. Анализ хромосомных препаратов 41
2.8. Статистическая обработка результатов измерений линейных параметров хромосом 42
ГЛАВА III. Результаты и обсуждение 43
1. Усовершенствование методики приготовления хромосомных препаратов льна 43
1.1. Повышение разрешающей способности хромосомного анализа с помощью пиридо[1,2-абензимидазолов 43
1.2. Усовершенствование метода приготовления давленных хромосомных препаратов 50
1.3. Тестирование воспроизводимости результатов маркирования хромосом льна с помощью метода DAPI-бэндинга и FISH с зондами 5S и 26S рДНК 53
2. Полиморфизм генома льна посевного 57
2.1. Идентификация хромосом льна посевного по рисункам DAPI-бэндинга и локализации сайтов рибосомных генов 57
2.2. Хромосомный полиморфизм льна посевного
2.2.1. Внутривидовой хромосомный полиморфизм 60
2.2.2. Внутрисортовой полиморфизм льна посевного
2.2.2.1. Внутрисортовой полиморфизм льна посевного по морфологии спутничной хромосомы 67
2.2.2.2. Внутрисортовой полиморфизм льна посевного по локализации генов рРНК на спутничной хромосоме 68
2.2.2.3. Внутрисортовой полиморфизм льна посевного по локализации рибосомных генов на хромосомах 3, 8,13 71
3. Разработка дополнительных молекулярно-цитогенетических маркеров для хромосом льна 75
3.1. Локализация последовательности теломерного повтора (TTTAGGG) на хромосомах льна 79
3.2. Локализация консервативного фрагмента генов
целлюлозосинтетазы CesA на хромосомах льна 79
Заключение 85
Выводы 86
Список литературы
