Введение
Глава 1. Литературный обзор 8
1.1. Теоретические основы метода изотопной хромато-масс-спектрометрии 8
1.2. Основные функциональные узлы изотопного хромато-масс-спектрометра 10
1.3. Метаболизм стероидных гормонов
1.3.1. Особенности биосинтеза стероидов в организме человека 18
1.3.2. Способы интерпретации результатов анализа 22
1.3.3. Синтетические аналоги эндогенных стероидов
1.3.3.1. Тестостерон 26
1.3.3.2. Эпитестостерон 29
1.3.3.3. Дигидротестостерон 30
1.3.3.4. Андростендион 32
1.3.3.5. Дегидроэпиандростерон З 3
1.3.3.6. Прегненолон 3 5
1.3.3.7. Форместан 36
1.3.3.8. Болдион и болденон 3 9
1.4. Подготовка образцов к анализу 42
1.4.1. Использование реактива Жирара 44
1.4.2. Иммуноаффинная хроматография 44
1.4.3. Фракционирование с помощью тонкослойной хроматографии 45
1.4.4. Твердофазная экстракция 45
1.4.5. Фракционирование методом высокоэффективной жидкостной хроматографии 46
Глава 2. Экспериментальная часть 49
2.1. Исходные вещества и материалы 49
2.2. Основное оборудование 53
2.3. Вспомогательное оборудование 53
2.4. Методика эксперимента
2.4.1. Приготовление растворов определяемых соединений и буферов 54
2.4.2. Твердофазная и жидкостно-жидкостная экстракция 56
2.4.3. Фракционирование методом высокоэффективной жидкостной хроматографии 57
2.4.4. Дериватизация 57
2.4.5. Взаимодействие с реактивом Жирара 58
2.4.6. Газохроматографическое определение стероидов 58
2.4.7. Масс-спектрометрическая идентификация стероидов 59
2.4.8. Условия окислительной конверсии стероидов з
2.4.9. Масс-спектрометрическое определение продукта конверсии 60
2.9.10. Пробоподготовка прогормональных препаратов 61
2.4.10. Подготовка образцов мочи к анализу 62
Глава 3. Пробоподготовка образцов мочи 65
3.1. Подбор условий жидкостно-жидкостной и твердофазной экстракции 65
3.2. Выбор условий разделения методом жидкостной хроматографии 68
3.3. Использование реактива Жирара 71
3.4. Дериватизация 73
Глава 4. Инструментальный анализ экстрактов 75
4.1. Выбор условий газохроматографического разделения 75
4.2. Масс-спектрометрическая идентификация целевых соединений 81
4.3. Подбор условий окислительной конверсии стероидов и масс-спектрометрической идентификации продукта конверсии 85
Глава 5. Валидация и аттестация разработанной методики 90
5.1. Метрологические характеристики разработанной методики 90
5.2. Внутрилабораторные критерии экзогенной природы стероидов 94
5.3. Межлабораторное сравнение результатов анализа 96
Глава 6. Изменение изотопного состава эндогенных стероидов после употребления их синтетических аналогов 98
6.1. Выделение и анализ активных компонентов прогормональных препаратов 98
6.2. Препарат №1 - тестостерон 103
6.3. Препарат №2 - дегидроэпиандростерон 111
6.4. Препарат №3 - прегненолон 119
6.5. Препарат №4 - болдион 126
6.6. Препарат №5 - 5а-андростан-Зр,17р-диол 134
6.7. Препарат №6 - 1-андростен-Зр,17р-диол 141
Заключение 150
Выводы 153
Список сокращений 154
Список литературы
