Введение
Глава 1. Обзор литературы 12
1.1. Фоторецепторы 12
1.1.1. Фитохромы 13
1.1.2. Криптохромы 14
1.1.3. Фототропины
1.2. Световой сигналинг 19
1.3. Фотоингибирование 21
1.4. Мультигенное семейство белков светособирающих комплексов 25
1.5. Эволюция семейства белков LHC 30
1.6. Классификация белков семейства CAB
1.6.1. Белки, содержащие одну трансмембранную спираль 33
1.6.2. Белки, содержащие две трансмембранные спирали 35
1.6.3. Белки, содержащие три трансмембранные спирали 36
1.6.4. Белки, содержащие четыре трансмембранные спирали 41
1.7. Индуцируемые интенсивным светом белки (Hlips) цианобактерий:
фотопротекция и локализация 43
1.7.1. Фотосинтетический аппарат цианобактерий 43
1.7.2. Hli белки цианобактерий 44
1.7.3. Гены hli и регуляция их экспрессии 46
1.7.4. Ассоциация Hli белков с ФС2 48
1.7.5. Фотозащитная роль Hli белков при биогенезе ФС2 50
1.7.6. Роль Hli белков в метаболизме хлорофилла 56
1.7.7. Белки, слитые с Hli-доменом 60
1.7.8. Ассоциация Hli белков с ФС1 62
Глава 2. Объекты и методы исследования 64
2.1. Штаммы цианобактерий 64
2.2. Условия выращивания 64
2.3. Выделение тилакоидных мембран 65
2.4. Лизис тилакоидных мембран 65
2.5. Ионообменная хроматография 65
2.6. Определение содержания хлорофилла и активности комплексов ФС1 66
2.7. Определение фотохимической активности ФС1 с помощью флуориметра DUAL-PAM-101 66
2.8. Определение фотохимической активности ФС1 по поглощению О2 в системе искусственных донора и акцептора 66
2.9. Определение концентрации белка по методу Бредфорд 2.10. Нативный электрофорез в ПААГ 68
2.11. Электрофорез белков в ПААГ по методу Леммли 70
2.12. Перенос белков на нитроцеллюлозную мембрану 71
2.13. Идентификация белков с помощью Вестерн-блот анализа 71
2.14. Обнаружение иммунных комплексов 72
2.15. Обнаружение иммунных комплексов с помощью однокомпонентного субстрата 3,3 ,5,5 -тетраметилбензидина 73
2.16. Идентификация белков с помощью MALDIOF 74
2.17. Конфокальная микроскопия 75
Глава 3. Результаты исследования 77
3.1. Соллюбилизация тилакоидных мембран и выделение хлорофилл-белковых комплексов 77
3.2. Ассоциация белков HliА/HliВ с тримерами ФС1 клеток дикого типа Synechocystis 78
3.3. Ассоциация белков HliA/HliB с мономерами ФС1 у мутанта, дефицитного по ФС2 80
3.4. Ассоциация белков HliA/HliB с пигмент-белковыми комплексами у мутанта PsaL (без тримеров ФС1) 82
3.5. Влияние условий выращивания клеток на ассоциацию белков HliA/HliB с тримерами ФС1 84
3.6. Индукция HliA/HliB в клетках мутанта Synechocystis, дефицитного по ФС1 и ФС2 86
3.7. Конфокальная лазерная сканирующая микроскопия клеток дикого типа и мутантов Synechocystis 88
3.8. Определение локализации белков HliA/HliB с помощью двумерного электрофореза и MALDIOF 90
3.9. Активность ФС1 клеток дикого типа и мутанта, дефицитного по ФС2, различающихся по содержанию белков HliA/HliB 95
Глава 4. Обсуждение результатов 99
Заключение 104
Выводы 106
Список цитируемой литературы 107
