Введение
Глава 1. Обзор литературы 12
1.1. Гематоэнцефалический барьер и эффекты ионизирующего излучения на его структуру и функции 12
1.2. Биохимические эффекты ионизирующего излучения 20
1.3. Фракционированное облучение 25
1.4. VEGF как биомаркер радиационного повреждения головного мозга 28
1.5. GFAP как биомаркер радиационного повреждения головного мозга 31
Глава 2. Материалы и методы 36
2.1. Клеточные методы 36
2.1.1. Характеристика модели ГЭБ in vitro 36
2.1.2. Исследование функционирования щелевых контактов в культуре астроци-тов крысы 36
А. Приготовление и окраска культур клеток 37
Б. Проточная цитофлуориметрия 38
2.2. Экспериментальные животные 40
2.2.1. Характеристика и условия содержания 40
2.2.2. Подготовка биологического материала 41
2.2.3. Внутривенное введение препаратов меченых антител 41
2.3. Протокол облучения 42
2.3.1. Облучение культур клеток 43
2.3.2. Облучение животных 43
2.4. Иммунохимические методы 44
2.4.1. Иммуноцитохимический анализ 45
2.4.2. Иммуноблот анализ 45
2.4.3. Иммуногистохимический анализ 46
2.4.4. Иммуноферментный анализ (Сэндвич-вариант) 46
2.4.5. Конъюгация препаратов антител с флуоресцентной меткой 52
2.4.6. Исследование деградации в крови антител, меченных флуоресцентной меткой 53
2.5. Количественный ПЦР-анализ в реальном времени 54
2.6. Статистический анализ 57
Результаты 59
Глава 3. Исследование проницаемости ГЭБ на модели in vitro 60
3.1. Морфологический анализ клеток HUVEC 60
3.2. Исследование изменения экспрессии белков плотных, адгезивных и щелевых контактов 67
3.3. Исследование изменения экспрессии мРНК белков плотных и адгезивных контактов 68
3.4. Влияние облучения на структуру и функции щелевых контактов 71
3.4.1. Исследование передачи красителя через щелевые контакты 71
3.4.2. Исследование изменения экспрессии белка Сх43 и соответствующего гена 80
Глава 4. Исследование проницаемости ГЭБ на модели in vivo 82
4.1. Исследование проницаемости ГЭБ в направлении мозг–кровь 83
4.2. Исследование проницаемости ГЭБ в направлении кровь– мозг 86
4.2.1. Исследование деградации антител в крови 86
4.2.2. Исследование проникновения через ГЭБ меченых антител 89
Глава 5. Качественный и количественный анализ экспрессии белковVEGF и GFAP и соответствующих генов 94
5.1. Исследование изменения экспрессии мРНК VEGF и GFAP 94
5.2. Исследование изменения экспрессии белка VEGF и GFAP 98
Глава 6. Обсуждение 104
Заключение 116
Выводы 118
Список литературы 119
