Введение
1. Обзор литературы 11
1.1 Исторические и эпизоотологические данные 11
1.2 Морфология и устойчивость к физико-химическим факторам 12
1.3 Выделение вируса 13
1.4 Патогенез 14
1.5 Клинические признаки и патологические изменения 15
1.6 Иммунитет 17
1.7 Профилактика метапневмовирусной инфекции 20
1.8 Диагностика метапневмовирусной инфекции
1.8.1 Иммуноферментный анализ 25
1.8.2 Контроль качества исследований с использованием ИФА 29
1.9 Заключение по обзору литературы 31
2. Собственные исследования 32
2.1. Материалы и оборудование 32
2.1.1 Пробы патологического материала. 32
2.1.2. Штаммы микроорганизмов . 32
2.1.3 Иммуноспецифические компоненты. 32
2.1.4 Экспериментальные животные. 32
2.1.5 Культуры клеток и органов. 32
2.1.6 Питательные среды и антибиотики 32
2.1.7 Химические реагенты, растворы, буферные смеси. 33
2.1.8 Оборудование. 34
2.1.9 Расходные материалы 35
2.1.10 Коммерческие наборы 36
2.2 Методы исследований. 36
2.2.1Выделение вируса в трахеальной органной культуре. 36
2.2.2 Культивирование вируса в первично-трипсинизированной культуре клеток фибробластов эмбрионов кур. 37
2.2.3 Электрофорез вирусных белков и иммуноблотинг 37
2.2.4 Определение титра инфекционной активности вируса в культуре клеток и органах 38
2.2.5 Непрямой твердофазный вариант ИФА 38
2.2.3. ОТ-ПЦР-РВ. 38
2.2.4. ОТ-ПЦР
2.2.5. Очистка продуктов ПЦР 39
2.2.6. Секвенирование. 39
2.2.7. Анализ нуклеотидных и аминокислотных последовательностей
2.2.11 Количественный анализ субпопуляций лимфоцитов 39
2.2.12 Определение продукции цитокинов. 40
2.2.13 Гистологическое исследование 40
2.2.14 Статистический анализ результатов. 40
3. Результаты собственных исследований 41
3.1Выделение изолятов 41
3.2 Разработка методики очистки и концентрирования МПВ птиц, получение иммуноспецифических компонентов для ИФА 43
3.3 Разработка тест-систем для оценки иммунного ответа кур при МПВИ 46
3.3.1 Разработка тест-системы ИФА для определения титра антител к МПВ птиц при тестировании сывороток в одном разведении 46
3.3.2 Разработка тест-систем ИФА по выявлению специфических к МПВ птиц иммуноглобулинов (Ig)А, IgМ и IgG в секреторных жидкостях кур 55
3.4 Изучение патогенеза и иммунного ответа восприимчивых цыплят на
экспериментальное заражение изолятами МПВ птиц 58
3.4.1 Изучение патогенеза и иммунного ответа цыплят на экспериментальное заражение изолятом aMPV/А/02/2014 58
3.4.2 Изучение патогенеза и иммунного ответа цыплят на экспериментальное заражение изолятом aMPV/B/12/2010 65
3.4.3 Изучение патогенеза и иммунного ответа цыплят на экспериментальное заражение изолятом aMPV/B/22/2010 71
3.5 Разработка набора 80
4. Обсуждение результатов исследований 87
5. Выводы 98
6. Практические предложения 100
7. Список использованной литературы
