Введение
1. Обзор литературы 16
1.1. Диагностика ортопоксвирусных инфекций человека 16
1.1.1. Классические методы родоспецифичной и видоспецифичной диагностики ортопоксвирусных инфекций человека 18
1.1.2. Молекулярно-диагностические методы в видоспецифичной диагностике ортопоксвирусных инфекций человека
1.1.2.1. Полимеразная цепная реакция 19
1.1.2.2. Полиморфизм длин рестрикционных фрагментов 21
1.1.2.3. Олигонуклеотидные микрочипы 25
1.1.2.4. ПЦР в реальном времени 29
1.1.2.5. Секвенирование 38
1.1.3. Заключение 43
1.2. Противооспенные вакцины 45
1.2.1. Первые противооспенные вакцинные препараты: источники и способы получения 45
1.2.2. К вопросу о происхождении вируса осповакцины 46
1.2.3. Противооспенные вакцины первого поколения: иммуногенность и реактогенность 51
1.2.4. Противооспенные вакцины второго поколения
1.2.4.1. Гетерогенность препаратов противооспенных вакцин первого поколения 57
1.2.4.2. Выбор клоновых вариантов для противооспенных вакцин второго поколения
1.2.5. Противооспенные вакцины третьего поколения 60
1.2.6. Противооспенные вакцины четвертого поколения 63
1.2.7. Субъединичные противооспенные вакцины 73
1.2.8. Заключение 86
2. Материалы и методы 88
2.1. Материалы 88
2.2. Методы 92
Результаты и обсуждение 107
3. Разработка методов индикации и дифференциации патогенных для человека ортопоксвирусов 107
3.1. Разработка метода детекции и дифференциации вирусов натуральной оспы и оспы обезьян с одновременной дифференциацией от вируса ветряной оспы на основе ПЦР в реальном времени в мультиплексном формате 107
3.1.1. Дизайн олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентно-меченых гибридизационных зондов 107
3.1.2. Конструирование внутреннего контрольного образца 116
3.1.3. Конструирование положительных контрольных образцов 121
3.1.4. Оптимизация параметров метода МПЦР в реальном времени 122
3.1.5. Определение основных аналитических и диагностических характеристик разработанного метода 125
3.1.6. Апробация разработанного метода на клинических образцах 128
3.2. Разработка методов родо- и видоспецифичной детекции ортопоксвирусов, патогенных для человека, на основе ПЦР в реальном времени в мультиплексном формате 130
3.2.1. Разработка метода видоспецифичной детекции ортопоксвирусов, патогенных для человека, на основе ПЦР в реальном времени в мультиплексном формате 130
3.2.2. Поиск подходов к видоспецифичной детекции вируса оспы коров с помощью ПЦР в реальном времени 131
3.2.3. Оптимизация метода видоспецифичной детекции ортопоксвирусов, патогенных для человека, на основе ПЦР в реальном времени в мультиплексном формате 147
3.3. Регистрация набора реагентов для амплификации ДНК вирусов натуральной оспы, оспы обезьян, оспы коров, осповакцины с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени «Вектор-МПЦРРВ-Оспа» 153
3.4. Мониторинг поксвирусных инфекций 164
4. Разработка и изучение противооспенных вакцин 181
4.1. Создание и изучение свойств высокоаттенуированного штамма вируса осповакцины с направленным нарушением шести индивидуальных генов вирулентности 181
4.1.1. Создание высокоаттенуированного штамма VAC5 вируса осповакцины с направленным нарушением пяти индивидуальных генов вирулентности 182
4.1.2. Изучение биологических свойств высокоаттенуированного штамма VAC5 вируса осповакцины 196
4.1.3. Создание и изучение биологических свойств высокоаттенуированного и высокоиммуногенного штамма VAC6 вируса осповакцины с направленным нарушением шести индивидуальных генов вирулентности 203
4.1.4. Анализ полной нуклеотидной последовательности генома вируса осповакцины штамм VAC6 206
4.2. Аттестация вакцинного и производственного штаммов VAC6
вируса осповакцины 216
4.2.1. Наработка вакцинного и производственного штаммов VAC6 вируса осповакцины 216
4.2.2. Изучение стабильности вакцинного и производственного штаммов VAC6 вируса осповакцины 219
4.2.3. Изучение подлинности вакцинного и производственного штаммов VAC6 вируса осповакцины 222
4.2.4. Изучение термостабильности вакцинного и производственного штаммов VAC6 вируса осповакцины 223
4.2.5. Оценка специфической активности вакцинного и производственного штаммов VAC6 вируса осповакцины 224
4.2.6. Изучение нейровирулентности вакцинного штамма VAC6 вируса осповакцины 227
4.2.7. Изучение остаточной вирулентности вакцинного штамма VAC6 вируса осповакцины 229
4.2.8. Изучение воспалительно-некротической активности вакцинного и производственного штаммов VAC6 вируса осповакцины 230
4.2.9. Изучение аномальной токсичности вакцинного и производственного штаммов VAC6 вируса осповакцины 2 4.2.10. Изучение стерильности вакцинного и производственного штаммов VAC6 вируса осповакцины 233
4.2.11. Исследование на отсутствие контаминации микоплазмами вакцинного и производственного штаммов VAC6 вируса осповакцины 234
4.2.12. Исследование пирогенности вакцинного и производственного штаммов VAC6 вируса осповакцины 235
4.2.13. Изучение стабильности при хранении вакцинного и производственного штаммов VAC6 вируса осповакцины 236
Заключение 239
Выводы 250
Список сокращений и условных обозначений 253
Список литературы
