Введение
2. Обзор литературы
2.1. Роль ЛПНП и воспаления в патогенезе атеросклероза 8
2.2. Сигнальные каскады ЛПНП в патогенезе атеросклероза 11
2.3. Роль воспаления в патогенезе атеросклероза 15
2.4. Роль ЛПВП в регрессии атеросклеротической бляшки 17
2.5. Противовоспалительные свойства ЛПВП 22
2.6. Роль аполипопротеина A-I в регуляции липидного обмена и воспаления 25
2.7. Сигнальные каскады, активируемые инсулином 29
2.8. Транскрипционный фактор FOXO1 32
2.9. Ядерные рецепторы семейства LXR 35
2.10. Регуляция экспрессии гена apoA-I 39
3. Материалы и методы 44
3.1. Ингибиторы сигнальных киназ, синтетические лиганды ядерных рецепторов и рекомбинантные белки 44
3.2. Антитела 44
3.3. Генетические конструкции 44
3.4. Сайт-направленный мутагенез 45
3.5. Клеточные культуры и трансфекция 45
3.6. -галактозидазный и люциферазный тесты 46
3.7. Обратная транскрипция (ОТ) 46
3.8. Полимеразная цепная реакция в реальном времени – RealTime-PCR 46
3.9. Иммунопреципитация хроматина (ChIP) 3.10. Иммуноферментный анализ (ELISA) 49
3.11. Иммуноблоттинг 50
3.12. Получение ядерных экстрактов, ДНК-аффинная хроматография 50
3.13. Иммунопреципитация 51
3.14. Иммуноцитохимия 51
3.15. Статистический анализ 51
4. Результаты 52
4.1. Перекись водорода подавляет экспрессию гена apoA-I 52
4.2. Транскрипционные факторы LXR и FOXO1 участвуют в уменьшении уровня мРНК apoA-I при оксидативном стрессе 54
4.3. FOXO1 связывается с сайтом B гепатоцитарного энхансера 55
4.4. AMPK подавляет активность гена apoA-I 56
4.5. Сайты B и C гепатоцитарного энхансера необходимы для подавления активности гена apoA-I при оксидативном стрессе 58
4.6. Инсулин регулирует экспрессию гена apoA-I 59
4.7. Инсулин модулирует активность гена apoA-I через различные участки 5` регуляторной области 61
4.8. Участие различных сигнальных каскадов в подавлении активности гена apoA-I
инсулином 63
4.9. NF-B и HNF4 участвуют в подавлении активности гена apoA-I инсулином через сайт
А гепатоцитарного энхансара 65
4.10. Ядерные рецепторы LXRs участвуют в подавлении активности гена apoA-I инсулином 66
4.11. FOXO1 и FOXA2 участвуют регуляции экспрессии гена apoA-I инсулином 69
4.12. Сайт B гепатоцитарного энхансера участвует в подавлении экспрессии гена apoA-I инсулином 72
4.13. Транскрипционные факторы FOXO1 и LXR, а также FOXA2 и LXR взаимодействуют в клетках HepG2 73
4.14. LXRs и FOXO1 связываются с сайтами B и C гепатоцитарного энхансера 74
4.15. Инсулин уменьшает связывание FOXO1 с гепатоцитарным энхансером 76
4.16. TO901317 защищает комплекс FOXO1/LXR от инсулин-зависимого экспорта из
ядра 77
4.17. FOXO1 и LXR возвращаются на гепатоцитарный энхансер после 48-часовой инкубации с инсулином 78
4.18. Комплекс транскрипционных факторов FOXO1/LXR необходим для подавления
экспрессии гена apoA-I цитокином TNF 79
4.19. Инсулин усиливает активность проксимального промотора гена apoA-I 80
4.20. Инсулин влияет на экспрессию генов транскрипционных факторов
5. Обсуждение результатов 83
6. Заключение 95
7. Выводы 96
8. Список сокращений 97
9. Список цитируемой литературы 101
