Введение
ГЛАВА 1. Глутамат и его рецепторы в патогенезерассеянного склероза (обзор литературы) 13
1.1. Эпидемиология рассеянного склероза 13
1.2. Этиология рассеянного склероза 15
1.3. Иммунопатогенез рассеянного склероза 19
1.4. Роль глуматата в патогенезе рассеянного склероза 30
1.4.1. Глутамат как нейромедиатор центральной нервной системы 30
1.4.2. Глутаматная эксайтотоксичность 34
1.4.3. Потенциальные источники и механизмы образованияизбыточного глутамата при рассеянном склерозе 35
1.5. Рецепторы глутамата и их участие в патогенезерассеянного склероза 41
1.5.1. Метаботропные рецепторы глутамата 41
1.5.2. Ионотропные рецепторы глутамата 44
1.5.3. NMDA-рецепторы глутамата 46
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования
2.1. Материалы исследования 52
2.1.1. Объект исследования 52
2.1.2. Клиническая характеристика доноров 52
2.1.3. Перечень использованных реактивов и материалов 54
2.2. Методы исследований 56
2.2.1. Забор крови/биоматериала 56
2.2.2. Выделение лимфоцитов периферической крови 56
2.2.3. Культивирование лимфоцитов периферической крови 57
2.2.4. Количественное определение цитокинов с помощьюиммуноферментного анализа 57
2.2.5. Иммунофенотипирование лимфоцитов 58
2.2.6. Внутриклеточное иммуноцитохимическое окрашиваниецитокинов 58
2.2.7. Выделение суммарной РНК 59
2.2.8. Синтез комплиментарной ДНК (кДНК) с помощьюРНК-зависимой ДНК-полимеразы 60
2.2.9. Количественная полимеразная цепная реакция с обратнойтранскрипцией (ОТ-ПЦР) в режиме реального времени 61
2.2.10. Методы исследования дифференциальной экспрессии генов 64
2.2.11. Биоинформатические методы анализа 65
2.2.12. Статистическая обработка результатов исследований з
ГЛАВА 3. Результаты исследования и их обсуждение .
3.1. Регуляция NMDA-рецепторами продукции цитокинов Т-лимфоцитами
3.1.1. Влияние блокады NMDA-рецепторов на продукцию цитокинов Т-клетками здоровых доноров
3.1.2. Эффекты блокады NMDA-рецепторов на продукцию цитокинов Т-клетками доноров - больных рассеянным склерозом
3.2. Регуляция NMDA-рецепторами дифференцировки Т-лимфоцитов
3.2.1. Эффект (+)-МК801 на экспрессию генов транскрипционных факторов, специфичных для Т-клеточных субпопуляций, в лимфоцитах здоровых доноров и доноров - больных рассеянным склерозом
3.2.2. Влияние (+)-МК801 на соотношение CD4 и CD8 Т-клеточных субпопуляций у здоровых и доноров - больных рассеянным склерозом доноров
3.2.3. Эффект блокады NMDA-рецепторов на направление дифференцировки и баланс CD4+ Т-клеточных субпопуляций у здоровых доноров и доноров - больных рассеянным склерозом
3.2.4. Эффект блокады NMDA-рецепторов на направление дифференцировки и баланс CD8+ Т-клеточных субпопуляций у здоровых доноров и доноров - больных рассеянным склерозом
3.3. Гены, дифференциально экспрессирующиеся при блокаде NMDA-рецепторов в Т-лимфоцитах
3.3.1. Экспрессионный профиль генов в Т-лимфоцитах здоровых доноров в условиях блокады NMDA-рецепторов
3.3.2. Экспрессионный профиль генов в Т-лимфоцитах доноров больных рассеянным склерозом в условиях блокады NMDA-рецепторов
Заключение.
Выводы.
Список литературы.
