Введение
1. Обзор литературы 19
1.1. Ишемия/реперфузия головного мозга 19
1.1.1. Патогенез ишемии/реперфузии головного мозга 20
1.1.2. Роль кислото-чувствительных ионных каналов в патогенезе ишемии головного мозга 22
1.1.3. Индукция воспаления в условиях ишемии/реперфузии головного мозга 24
1.1.4. Роль глутамата и гамма-аминомасляной кислоты в ишемическом повреждении головного мозга 29
1.1.5. Кислород-связывающая функция крови в условиях ишемии и реперфузии 30
1.1.6. Роль дисфункции митохондрий и активных форм кислорода в патогенезе ишемии/реперфузии головного мозга 32
1.2. Антиоксидантная система организма 36
1.2.1. Ферментативное звено антиоксидантной системы 37
1.2.2. Неферментативное звено антиоксидантной системы 53
1.2.2.1. Водорастворимые антиоксиданты 53
1.2.2.2. Жирорастворимые низкомолекулярные антиоксиданты 55
1.3. Характеристика мелатонина 57
1.3.1. Синтез мелатонина в организме 57
1.3.2. Биологическая роль мелатонина в организме 60
1.3.3. Вещества, корригирующие уровень мелатонина 62
1.3.3.1. Мелаксен 62
1.3.3.2. Эпифамин 63
1.3.3.3. Вальдоксан 64
Экспериментальная часть 66
Глава 2. Объект и методы исследования 66
2.1. Объект исследования 66
2.2. Характеристика тестируемых препаратов 66
2.3. Методы исследования 67
2.3.1. Моделирование ишемии/реперфузии головного мозга у крыс 67
2.3.2. Подготовка материала для биохимических исследований 67
2.3.3. Оценка уровня мелатонина по содержанию мелатонинсульфата у крыс 68
2.3.4. Определение содержания лактата в головном мозге крыс 68
2.3.5. Измерение активности ферментов 68
2.3.5.1. Определение активности ферментов, сопряженных с окислительно восстановительными превращениями НАД и НАДФ 69
2.3.5.1.1. Определение активности глутатионпероксидазы 69
2.3.5.1.2. Определение активности глутатионредуктазы 70
2.3.5.1.3. Определение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы 70
2.3.5.1.4. Определение активности НАДФ-зависимой изоцитратдегидрогеназы 70
2.3.5.2. Определение активности глутатионтрансферазы 71
2.3.5.3. Определение активности аконитатгидратазы 71
2.3.5.4. Определение активности супероксиддиссмутазы 72
2.3.5.5. Определение активности каталазы 73
2.3.6. Оценка уровня транскриптов генов 74
2.3.6.1. Выделение тотальной РНК 74
2.3.6.2. Обратная транскрипция и полимеразная цепная реакция 74
2.3.7. Оценка степени развития апоптотических процессов 76
2.3.7.1. Определение степени фрагментации ДНК 76
2.3.7.1.1. Выделение тотальной ДНК 76
2.3.7.1.2. Электрофорез ДНК 77
2.3.7.2. Оценка активности каспаз 78
2.3.8. Определение содержания компонентов неферментативной антиоксидантной системы. 78
2.3.8.1. Определение концентрации восстановленного глутатиона 78
2.3.8.2. Определение содержания цитрата 79
2.3.9. Оценка оксидативного статуса 80
2.3.9.1. Определение интенсивности биохемилюминесценции 80
2.3.9.2. Определение содержания диеновых конъюгатов 81
2.3.9.3. Оценка окислительной модификации белков 82
2.3.10. Унифицированный метод определения содержания общего белка по биуретовой реакции 83
2.4. Статистическая обработка экспериментальных данных 85
Глава 3. Анализ воздействия мелаксена и эпифамина на интенсивность нейровоспалительных и свободнорадикальных процессов в тканях крыс с ишемией/реперфузией головного мозга 87
3.1. Концентрация мелатонинсульфата в моче экспериментальных животных в условиях развития ишемии/реперфузии и введения мелаксена и эпифамина 87
3.2. Уровень лактата в мозге крыс в условиях развития ишемии/реперфузии и введения мелаксена и эпифамина 88
3.3. Воздействие мелатонин-корригирующих препаратов на показатели окислительного стресса в тканях крыс при развитии ишемии/реперфузии головного мозга 90
3.4. Воздействие мелатонин-корригирующих препаратов на уровень транскриптов генов факторов HIF-1 и NF-kB у крыс в условиях развития ишемии/реперфузии головного мозга 99
Глава 4. Интенсивность протекания апоптотических процессов при введении мелаксена на фоне развития ишемии/реперфузии головного мозга у крыс 103
3.1. Степень фрагментации ДНК в мозге крыс в условиях развития ишемии/реперфузии и введения мелаксена 103
3.2. Воздействие мелаксена на активность каспаз при ишемии/реперфузии головного мозга у крыс 106
Глава 5. Воздействие мелатонин-корригирующих препаратов на функционирование компонентов антиоксидантной системы при ишемии/реперфузии головного мозга 109
5.1. Воздействие мелатонин-корригирующих препаратов на функционирование супероксиддисмутазы и каталазы в тканях крыс с ишемией/реперфузией головного мозга 109
5.2. Воздействие мелатонин-корригирующих препаратов на функционирование глутатионовой антиоксидантной системы в условиях развития ишемии/реперфузии головного мозга у крыс 117
5.3. Воздействие мелаксена и эпифамина на активность ферментов поставщиков НАДФН для глутатионовой антиоксидантной системы 128
5.4. Транскрипционная регуляция функционирования компонентов антиоксидантной системы в условиях развития ишемии/реперфузии головного мозга у крыс и введения мелатонин-корригирующих препаратов 133
Заключение 136
Выводы 143
Список литературы 145
