Введение
Глава 1. Обзор литературы 13
1.1. Рак молочной железы. Классификация 13
1.1.1. Химиотерапия опухолей 16
1.1.2. Таксаны: механизм действия 17
1.2. Множественная лекарственная устойчивость 20
1.2.1. Механизмы множественной лекарственной устойчивости 20
1.2.2. ABC-транспортеры: структура и механизм действия 22
1.2.3. ABCC - подсемейство белков множественной лекарственной устойчивости (MRP) 25
1.2.4. ABCC10 белок множественной лекарственной устойчивости 30
1.2.5. Мышиная модель, нокаутная по гену Abcc10 31
Глава 2. Материалы и методы 35
2.1. Материалы 35
2.2. Методы 37
2.2.1. Клеточные культуры 37
2.2.2. Доклиническая мышиная модель рака молочной железы MMTV-PyVmT... 37
2.2.3. Ортотопическая модель рака молочной железы 38
2.2.4. Получение первичных клеточных культур из опухолей, развившихся у MMTV-PyVT;Abcc10+/+ и MMTV-PyVT;Abcc10-/- мышей 38
2.2.5. Определение клеточной пролиферации in vitro 38
2.2.6. Тест на формирование колоний 39
2.2.7. Тест на "зарастание раны" 39
2.2.8. Определение адгезионной активности клеток 39
2.2.9. Анализ апоптоза 40
2.2.10. Анализ клеточного цикла 41
2.2.11. Измерение накопления [3H]-доцетаксела в клетках 41
2.2.12. Количественная ПЦР в реальном времени 42
2.2.13. Вестерн-блот анализ 43
2.2.14. Иммуннофлуоресцентный анализ 44
2.2.15. Иммуногистохимический анализ 44
2.2.16. Статистическая обработка результатов 45
Глава 3. Результаты 46
3.1. Экспрессия ABCC10 46
3.1.1. Анализ экспрессии белка ABCC10 в клеточных линиях рака молочной железы человека 46
3.1.2. Анализ экспрессии гена ABCC10 в нормальной и опухолевой тканях молочной железы человека 48
3.1.3. Анализ экспрессии белка ABCC10 в опухолевой ткани молочной железы человека методом иммуногистохимического анализа 50
3.2. Влияние экспрессии ABCC10 на развитие рака молочной железы и
терапевтический эффект доцетаксела 53
3.2.1. Характеристика опухолей молочной железы MMTV-PyVmT;Abcc10+/+ и
MMTV-PyVmT;Abcc10-/- мышей 53
3.2.1.1 Влияние ABCC10 на скорость роста опухолей молочной железы PyVmT мышей 53
3.2.1.2 Влияние Abcc10 на агрессивность и метастазирование рака молочной железы 54
3.2.2. Характеристика первичных культур клеток, полученных из MMTV-PyVmT;Abcc10+/+ и MMTV-PyVmT;Abcc10-/- опухолей 57
3.2.2.1. Морфофизиологические характеристики MMTV-PyVmT;Abcc10+/+ и MMTV-PyVmT;Abcc10-/- первичных культур клеток 57
3.2.2.2. Влияние экспрессии ABCC10 на экспрессию ABC-транспортеров 62
3.2.3. Цитотоксическая характеристика MMTV-PyVmT;Abcc10+/+ и MMTV-
PyVmT;Abcc10-/- клеточных линий in vitro 64
3.2.3.1. Повышенная чувствительность Abcc10 нокаутных клеточных линий к химиотерапевтическим препаратам 64
3.2.3.2. Влияние доцетаксела и паклитаксела на развитие апоптоза и арест клеточного цикла 68
3.2.3.3. Накопление доцетаксела, как субстрата ABCC10, в MMTV-PyVmT;Abcc10+/+ и MMTV-PyVmT;Abcc10-/- клетках 70
3.2.4. Цитотоксическая характеристика MMTV-PyVmT;Abcc10+/+ и MMTV-PyVmT;Abcc10-/- клеточных линий in vivo 70
3.2.5. Влияние экспрессии ABCC10 на терапевтический эффект доцетаксела 74
Глава 4. Обсуждение 77
Заключение 84
Выводы 85
Список литературы 86
