Введение
1. Введение 4
2. Обзор литературных данных 6
2.1. Раннее развитие головного мозга позвоночных 6
2.1.1. Нейральная индукция 6
2.1.2. Дифференцировка нервной пластинки, нервного гребня и пан-плакодной области эктодермы ... 8
2.1.3. Передний мозг, генетические мишени гомеодоменного транскрипционного факторахаип: Малая rtoa3aras-dval, секретируемые белки группы agr 11
2.2. Регенерация позвоночных 18
2.2.1. Введение 18
2.2.2. Регенерация. Виды регенерации
2.2.2.1. Физиологическая регенерация 19
2.2.2.2. Репаративная регенерация 19
2.2.2.3. Автотомия 19
2.2.3. Способы репаративной регенерации 20
2.2.3.1 Морфаллаксис 20
2.2.3.2. Эпиморфоз 20
2.2.3.3. Гипертрофия
2.2.4. Эпиморфная регенерация низшихпозвоночных 22
2.2.5. Молекулярные механизмы регенерации
2.2.5.1. Вакуолярная Н+ АТФаза, Na(V)1.2 канал и активные формы кислорода 26
2.2.5.2. TGFbeta сигнальный путь 26
2.2.5.3. Матриксные металлопротеиназы 27
2.2.5.4. Wnt сигнальный путь 28
2.2.5.5. Fgf сигнальный путь 30
2.2.5.6. BMP сигнальный путь 32
2.2.5.7. Hedgehog сигнальный путь 33
2.2.5.8. Igf сигнальный путь 34
2.2.5.9. Другие сигнальные каскады 35
2.2.6. Гены семействами и ras-dva в регенерации 36
3. Материалы и методы; 37
3.1. Лабораторные животные 37
3.2. Используемые реактивы 37
3.3. Ферменты 38
3.4. Используемые растворы 38
3.5. Микробиологические среды 41
3.6. Используемое оборудование 41
3.7. Бактериальные штаммы и микробиологические среды 42
3.8. Используемые праймеры для realtime-pcr 42
3.9. Эксперименты
3.9.1. Блокирование эндогенныхмРНК целевых генов при помощи микроинъекций синтетических анти-смысловыхморфолиновых олигонуклеотидов 44
3.9.2. Клонирование генов для последующих синтезов - транскрипция in vitro и синтез dig-зондов для гибридизации in situ 46
3.9.3. Транскрипция in vitro 47
3.9.4. Гибридизация in situ 47
3.9.5. Метод ПЦР (полимеразной цепной реакции) в реальном времени Realime-PCR 50
3.9.6. Получение трансгенных лягушек 54
3.9.7. Парафиновые срезы 57
3.9.8. Вибратомные срезы 59
3.9.9. Криотомные срезы 60
3.9.10. Метод Tunel
4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 62
4.1. Участие генов xag2 и ras-dvai в раннем развитии мозга эмбрионов африканской шпорцевой лягушки x enopus laevis 62
4.1.1. Ras-dval регулирует развитие конечного мозга посредством непрямой активации транскприпционного фактора FoxGl 63
4.1.2. Малая ГТФаза Ras-dval участвует в опосредованной активации экспрессии Agr генов во внешнем слое ненейральной антериорной эктодермы путем передачи сигнала от фактора Fgf8 64
4.1.3. Фенотипические эффекты подавления функции Agr у головастиков Xenopus схожи с эффектами ингибирования Ras-dval 71
4.1.4. Fgf8, Ras-dval и Agr связаны в единой сигнальной петле обратной связи.. 72
4.1.5. Ras-dval-зависимый Fgf8 сигналит индуцирует экспрессию Agrs путем регуляции экспрессии 0tx2 75
4.1.6. Заключение 78
4.2. Участие генов agr и ras-dva в регенерации задней почки конечности и хвоста головастиков шпорцевой лягушки xenopus laevis и плавников рыбы danio rerio 80
4.2.1. Участие генов Agr в регенерации хвоста и почки конечности головастиков Xenopus laevis 81
4.2.2. Участие генов Agr в регенерации плавников рыбы Danio rerio 89
4.2.3 Участие генов Ras-dva в регенерации придатков тела головастиков
Xenopus и плавников Danio 101
5. Выводы 116
6. Список используемой литературы 117
7. Список сокращений
