Введение
Глава 1 Общие сведения об ангиотензин-превращающем ферменте 7
1.1. Локализация и функции ангиотензин-превращающего фермента в организме 7
1.2. Структура гена ангиотензин-превращающего фермента 11
1.3. Первичная структура ангиотензин-превращающего фермента и
особенности углеводной компоненты фермента 12
1.4. Пространственная структура ангиотензин-превращающего фермента.. 16
1.4.1. Пространственная структура С-домена ангиотензин-превращающего фермента человека 17
1.4.2. Пространственные структуры комплексов С-домена ангиотензин-превращающего фермента с лизиноприлом, каптоприлом и эналаприлатом 21
1.4.3. Пространственные модели N-домена ангиотензин- превращающего фермента и комплекса N-домена с лизиноприлом . 25
1.4.4. Механизм функционирования активных центров ангиотензин- превращающего фермента 30
1.5. Каталитические свойства отдельных N- и С-доменов ангиотензин- превращающего фермента и доменов в составе соматического фермента 32
Глава 2 Активация ангиотензин-превращающего фермента хлорид-анионами . 36
2.1. Влияние хлорид-анионов на N- и С-домены ангиотензин- превращающего фермента 42
2.2. Аминокислоты, отвечающие за связывание хлорид-анионов в ангиотензин-превращающем ферменте 46
2.3. Хлорид-связывающие центры в С-домене и в гомологах ангиотензин- превращающего фермента 53
Экспериментальная часть
CLASS Глава 3 Материалы и методы исследования CLASS 56
3.1. Материалы 56
3.2. Методы исследования 58
3.2.1. Синтез аффинного сорбента 58
3.2.2. Выделение и очистка соматического ангиотензин-превращающего фермента 59
3.2.3. Выделение и очистка тестикулярного ангиотензин- превращающего фермента 60
3.2.4. Получение N-домена соматического ангиотензин-превращающего фермента 61
3.2.5. Определение концентрации и чистоты выделенных препаратов фермента 62
3.2.6. Обессоливание ангиотензин-превращающего фермента 62
3.2.7. Подготовка образцов к секвенированию 62
3.2.8. Кинетические измерения 63
3.2.9. Исследование структуры ангиотензин-превращающего фермента методами биоинформатики 65
Результаты и их обсуждение
Глава 4 Получение трех форм ангиотензин-превращающего фермента 68
4.1. Получение и характеристика соматического ангиотензин-превращающего фермента быка 68
4.2. Получение и характеристика тестикулярного ангиотензин-превращающего фермента быка 70
4.3. Получение N-домена ангиотензин-превращающего фермента быка 70
4.3.1. Каталитические характеристики N-домена ангиотензин-превращающего фермента 78
Глава 5 Влияние хлорид-анионов на кинетические характеристики ангиотензин-превращающего фермента 82
5.1. Влияние хлорид-анионов на кинетические параметры гидролиза Cbz-Phe-His-Leu под действием С- и N-доменов ангиотензин- превращающего фермента 84
5.1.1. Определение влияния ионной силы раствора на активности С- и N-доменов ангиотензин-превращающего фермента быка 90
5.1.2. Определение механизма действия хлорид-анионов в реакции гидролиза Cbz-Phe-His-Leu под действием N- и С-доменов ангиотензин-превращающего фермента 92
5.2. Влияние хлорид-анионов на кинетические параметры гидролиза Fa-Phe-Gly-Gly под действием С- и N-доменов ангиотензин- превращающего фермента 104
5.2.1. Определение механизма действия хлорид-анионов в реакции гидролиза Fa-Phe-Gly-Gly под действием N- и С-доменов ангиотензин-превращающего фермента 107
5.3. Влияние хлорид-анионов на кинетические параметры гидролиза Cbz-Phe-His-Leu под действием соматического ангиотензин- превращающего фермента и определение механизма действия хлорид-анионов в реакциях, катализируемых данной формой фермента 110
Глава 6 Построение моделей пространственных структур N- и С-доменов ангиотензин-превращающего фермента быка 115
6.1. Сравнение аминокислотных последовательностей N- и С-доменов ангиотензин-превращающего фермента быка и человека 115
6.2. Общие сведения о пространственных моделях N- и С-доменов ангиотензин-превращающего фермента быка 119
6.2.1. Аминокислоты, отвечающие за связывание субстрата Cbz-Phe-His-Leu в N- и С-доменах ангиотензин- превращающего фермента быка 125
6.2.2. Пространственное расположение потенциальных центров связывания хлорид-анионов в моделях^- и С-доменов ангиотензин-превращающего фермента быка 131
6.2.3. Роль С12 в функционировании однодоменных форм ангиотензин- превращающего фермента быка 133
6.2.4. Оценка разницы в энергиях связывания хлорид-аниона С12 с N- и С-доменами ангиотензин-превращающего фермента 136
6.2.5. Роль С11 в функционировании однодоменных форм ангиотензин- превращающего фермента быка 142
Выводы 148
Список литературы 149
