Введение
Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ГЕТЕРОКАРИОЗ В ГЕНЕТИЧЕСКОМ АНАЛИЗЕ У ГРИБОВ 9
1. Гетерокариоз в жизненном цикле грибов 12
I. Образование гетерокарионов у различных видов грибов...12
1-І. Особенности строения и лсизненного цикла грибов
как предпосылка возникновения гетерокарионов 12
1-2. Основные механизмы образования гетерокарионов 14
1-3. Гетерокариоз у дрожжей 16
2. Основные особенности гетерокариоза у грибов 19
2-І. Парасексуальный процесс. 19
2-2. Элементы парасексуального процесса
у Saccharomyces cerevisiae 20
2-3. Сегрегация гетерокарионов .23
2-4. Сегрегация гетерокарионов S.cerevisiae .24
3. Значение гетерокариоза в жизненном цикле грибов 26
2. Использование явления гетерокариоза в генетическом анализе.27
I. Взаимодействие генов в гетерокарионе .27
1-І. Исследование характера доминантно-рецессивных отношений и межгенных взаимодействий в гетерокарионах в зависимости от соотношения различных типов геномов..28
1-2. Сравнение характера взаимодействия генов у
гетерозиготных диплоидов и гетерокарионов 30
1-3. Взаимодействие генов в гетерокарионах
S.cerevisiae ЗІ
2. Генетическая рекомбинация в гетерокарионах 32
2-І. Использование сегрегации геномов и плазмонов
для локализации генетических детерминантов.
Тест с гетерокарионом 32
2-2. Тест с гетерокарионом у S.cerevisiae 34
2-3. Использование сегрегации геномов и плазмонов для изучения взаимодействия ядерных и цитоплазматических генов 37
2-4. Использование цитодукции у S.cerevisiae Для изучения взаимодействия ядерных и цитоплазматических генов...38
2-5. Парасексуальный процесс в генетическом анализе 40
2-6. Генетический анализ у s.cerevisiae с использо
ванием элементов парасексуального процесса 41
3. Заключение 43
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЕ! .47
1. Исходные штаммы. 47
2. Среды и условия культивирования штаммов 47
3. Методы 49
I. Отбор мутантов 49
1-І. Индукция мутантов, способных к цитодукции
с повышенной частотой ( Hfc+ ) 49
1-2. Отбор дыхательно-некомпетентных мутантов 50
1-3. Отбор мутантов по гену lys2 50
2. Гибридологический анализ .50
3. Тест на супрессивность мутаций rho" 51
4. Оценка частоты спонтанного ревертирования 52
5. Статистическая обработка результатов 53
Глава 3. РАЗРАБОТКА СЕЛЕКТИВНОЙ СИСТЕМЫ ПРОДУКЦИИ 54
1. Принципиальная схема селективной системы цитодукции 54
2. Отбор цитодуктантов в селективной системе 56
I. Качественный тест на цитодукцшо 56
2. Селективные системы цитодукции 56
2-І. Отбор цитодуктантов в системе I 58
2-2. Отбор цитодуктантов в системе II и Ш 61
2-3. Реципрокный перенос цитоплазмы в селективных системах I, П, Ш ....66
3. Факторы, влияющие на частоту выявления цитодуктантов
в качественном тесте 68
I. Влияние цитоплазматических факторов на частоту
выявления цитодуктантов 68
2. Влияние супрессивности мутаций rho- на частоту
выявления цитодуктантов 71
3. Влияние метионина на частоту выявления цитодуктантов...72
4. Заключение 74
Глава 4. МУТАНТЫ,СПОСОБНЫЕ К ДЙТОДУКЦЙИ С ПОВЫШЕННОЙ ЧАСТОТОЙ. 1. Метод отбора мутантов, способных к цитодукции с повышенной частотой
2. Отбор и характеристика мутантов
Ь» Частота цитодукции при использовании мутантов Hfc+ в качестве доноров 77
2. Ослабление комплементации селективных маркеров у гибридов с мутантами Hf с .78
3. Гибридологический анализ цит1-7А-П192 80
4. Тест на доминантность ННЯ 80
5. Определение уровня плоидности мутантов в экспресс-тесте 84
3.Заключение .87
Глава 5. ПЕРЕНОС ХРОМОСОМ В СЕЛЕКТИВНОЙ СИСТЕМЕ 88
1. Отбор цитодуктантов с переносом хромосом II и III (исключительных цитодуктантов) 89
2. Доказательство переноса хромосом у исключительных цитодуктантов 97
3. Стабильность исключительных цитодуктантов 98
4. Заключение 101
Глава 6. ПЕРЕНОС ХИМЕРНЫХ ПЛАЗМИД В СЕЛЕКТИВНОЙ СИСТЕМЕ 102
1. Отбрр цитодуктантов с переносом плазмид YRCEN3I
и рТе(СЖЗ)41 16
2. Стабильность плазмид у цитодуктантов 108
3. Заключение ИЗ
Глава 7. СОБЫТИЯ, НАРУШАЮЩИЕ СЕЛЕКТИВНОСТЬ СИСТЕМЫ 116
1. Количественная оценка событий, приводящих к образованию
прототрофов при селекции исключительных цитодуктантов 117
I. Реверсии по аденину у гибрида
2. Реверсии по аденину у 7А-ПІ92 119
2. Количественная оценка частоты событий, нарушающих селективность системы при отборе мутантов Hfс+ 120
I. Фенотипическая характеристика супрессоров SLT 121
2. Влияние мутаций rho*" на эффективность супрессии SLT ..123
3. Генетический анализ мутантов Slt+ 124
4. Кодоновая специфичность супрессоров SLT 125
5. Природа вторичных реверсий His""-* His+ у мутантов Slt+..I28
6. Природа мутаций SLT 130
3. Заключение 133
Глава 8. ЭФФЕКТИВНОСТЬ СЕЛЕКТИВНОЙ СИСТЕМЫ ЦОТОДУКЦШ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ РЕЩССИВНЫХ СУПРЕССОРОВ. ПЕРСПЕКТИВЫ ДАЛЬНЕЙШИХ ИССЛЕДОВАНИЙ 135
1. Частота цитодукции в селективной системе 135
2. Уровень селективности системы 137
3. Мутанты Hfc+ , повышающие эффективность системы 140
4. Заключение 140
ВЫВ ОДЫ 144
ЛИТЕРАТУРА 145
