Введение
Глава 1. Современные представления об особенностях этиопатогенеза глаукомной оптической нейропатии и методах предупреждения еенеуклонного прогрессирования (обзор литературы) 10
1.1. Проблема первичной открытоугольной глаукомы на современном этапе 10
1.2. Молекулярные механизмы гибели ганглиозных клеток сетчатки при глаукоме, морфология, модуляторы апоптоза 14
1.3. Нейротрофические факторы
1.3.1. Защитные и восстановительные свойства NGF 23
1.3.2. Защитные и восстановительные свойства BDNF 25
1.4. Современные методы лечения нейродегенеративных заболеваний 27
1.4.1. Генная терапия 27
1.4.2. Клеточная терапия как альтернатива фармакологической нейропротекции 28
1.4.3. Экзогенная стимуляция мультипотентных мезенхимальных стволовых
клеток 31
1.5. Ниша стволовых клеток 33
Глава 2. Материалы и методы исследований 35
2.1. Первый этап. Выделение и культивирование ММСК лимба 36
2.1.1. Характеристика использованного донорского материала 36
2.1.2. 2D субкультивирование ММСК лимба 40
2.1.3. Проведение проточной цитофлуориметрии 41
2.2. Второй этап. Стимуляция 2D культуры ММСК лимба 43
2.2.1. Иммуноцитохимическое исследование первичной культуры ММСК 44
2.3. Третий этап. 3D культивирование 46
2.4. Четвертый этап. Определение количественного содержания нейротрофинов в культуральной среде ММСК лимба глаза человека
2.4.1. Определение количественного содержания BDNF 49
2.4.2. Определение количественного содержания NGF 50
2.5. Пятый этап. Определение иммунофенотипа 3D культуры ММСК лимба 51
2.6. Лабораторные материалы и методы исследования
2.6.1. Нормотермическое культивирование 52
2.6.2. Криоконсервация/дефростация 52
2.6.3. Оценка жизнеспособности клеток 53
2.6.4. Перечень использованного лабораторного оборудования, расходных материалов и инструментов 54
2.7. Методы статистической обработки результатов исследований 58
Глава 3. Результаты экспериментальных исследований 59
3.1. Результаты разработки протокола культивирования ММСК лимба 59
3.1.1. 2D субкультивирование ММСК лимба 68
3.1.2. Иммунофенотипирование 2D культуры клеток
3.2. Проведение индукции 2D культуры ММСК лимба 77
3.3. Результаты 3D культивирования 81
3.4. Секреция нейротрофических факторов BDNF и NGF 3D культурой ММСК лимба 97
3.5. Иммунофенотипические характеристики 3D культуры ММСК лимба 102
Заключение 117
Выводы 128
Практические рекомендации 130
Основные обозначения и сокращения 131
Библиография
