Введение
Глава 1. Современное представление исследований в области технологии получения субстанции полирибозилрибитолфосфата (обзор литературы) 15
1.1 Заболевания, вызываемые Haemophilus influenzae тип b 15
1.2 Общая характеристика H. influenzae тип b 17
1.3 Выделение и идентификация H. influenzae тип b 19
1.4 Технология культивирования H. influenzae тип b 28
1.5 Технология субстанции полисахарида полирибозилрибитолфосфата 40
1.6 Вакцины, как лекарственные средства 43
Заключение по главе 1 50
Глава 2. Материалы и методы 51
2.1 Объекты исследования 51
2.2 Методы исследования 52
2.2.1 Выделение штамма H. influenzae тип b 52
2.2.2 Идентификация штамма H. influenzae тип b 53
2.2.3 Культивирование H. influenzae тип b 59
2.2.4 Подбор среды хранения 61
2.2.5 Получение Главного и Рабочего банков культуры 62
2.2.6 Масштабирование процесса культивирования 64
2.2.7 Очистка и выделение целевого продукта полисахарида ПРФ 66
2.2.8 Контроль промежуточных продуктов и субстанции 68
2.2.9 Статистическая обработка данных 72
Глава 3. Технология получения оригинального штамма продуцента полисахарида полирибозилрибитолфосфата 73
3.1 Изоляция штамма и выделение чистой культуры. Изучение культурально-морфологических и биохимических свойств штамма Haemophilus influenzae SPB тип b 73
3.1.1 Подтверждение подлинности (серотипа) 75
3.1.2 Оксидазная активность 76
3.1.3 Каталазная активность 77
3.1.4. Рост в присутствии Х и V факторов 78
3.1.5 Чистота культуры и окраска по Граму 79
3.2 Проведение генетической идентификации штамма Haemophilus influenzae тип b 81
3.3 Разработка среды хранения H. influenzae тип b 82
3.4 Оформление паспорта на штамм для дальнейшей регистрации и депонирования в ГКПМ 84
3.5 Технологический этап «Создание Рабочего банка культуры H. influenzae SPB тип b В-7884» 85
Заключение по главе 3 87
Глава 4. Разработка технологии получения субстанции ПРФ на основе штамма Haemophilus influenzae SPB тип b В-7884 89
4.1 Определение концентрации ПРФ 89
4.2 Разработка технологического этапа приготовления питательных сред 95
4.3 Разработка технологического этапа подготовки посевного материала 104
4.4 Разработка технологического этапа получения производственной культуры 105
4.4.1 Влияние рН на биосинтез ПРФ 105
4.4.2 Влияние рибозы на биосинтез ПРФ 106
4.6 Разработка и масштабирование технологического этапа «Культивирование Haemophilus influenzae SPB тип b В-7884 в ферментере» 109
4.7 Разработка способа очистки и выделения целевого продукта полисахарида ПРФ 114
4.7.1 Разработка технологии глубинной фильтрации культуральной жидкости. Технологический этап «Отделение микробной массы» 114
4.7.2 Разработка технологии отделения бактериальной массы. Технологический этап «Отделение микробной массы» 116
4.7.3 Разработка технологии очистки полисахарида ПРФ. Технологический этап «Концентрирование и диафильтрация» 117
4.7.4 Технологический этап «Осаждение полисахарида ПРФ» 119
4.7.5 Разработка технологии гомогенизата. Технологический этап «Гомогенизация осадка (полисахарида ПРФ)» 120
4.7.6 Разработка технологии экстрагирования ПРФ. Технологический этап «Экстракция полисахарида ПРФ» 121
4.7.7 Разработка технологии осветляющей фильтрации. Технологический этап «Осветление промежуточного продукта» 122
4.7.8 Разработка технологии осаждения ПРФ. Технологический этап «Осаждение ПРФ раствором хлорида натрия» 123
4.7.9 Хранение субстанции ПРФ. Технологический этап «Замораживание субстанции ПРФ» 123
4.8 Контроль субстанции ПРФ 124
4.9 Изучение стабильности субстанции ПРФ 127
4.10 Краткое описание технологии конъюгированной вакцины для профилактики инфекций, вызываемых Haemophilus influenzae тип b 134
Заключение по главе 4 135
Глава 5. Технология субстанции полисахарида ПРФ 137
5.1 Изложение технологического процесса 137
5.2 Технологическая схема 143
5.3 Аппаратурная схема производства 147
Заключение по главе 5 149
Заключение 150
Список сокращений 152
Список литературы 154
