Введение
1. Введение 4
2. Обзор литературы 6
2.1 Систематическое положение трипаносоматид 6
2.2 Субклеточная локализация и организация кинетопластиой ДНК (кпДНК) 8
2.3 Общая характеристика кинетопластиой ДНК (кпДНК) 9
2.4 Организация миникольцевых молекул кпДНК 15
2.5 Организация максикольцевых молекул кпДНК 19
3. Материалы и методы 33
3.1 Объекты исследования 33
3.2 Среды 33
3.3 Ферменты и реактивы 34
3.4 Выделение тотальной ДНК 37
3.5 Выделение кинетопластной ДНК 38
3.6 Рестрикция кинетопластной ДНК 40
3.7 Полимеразная цепная реакция (ПЦР) 40
3.8 Метод long PCR в присутствии бетаина с целью получения полной ДО 47
3.9 Очистка ПЦР-продуктов 50
3.10 Электрофорез ДНК в агарозном геле 50
3.11 Клонирование рестрикционных фрагментов ДО максикольцевой ДНК 51
3.12 Определение последовательности ДНК по Сэнгеру 56
4. Результаты и обсуждения 58
4.1 Различия гена ND8 консервативной области (КО) максикольцевой кпДНК между Leptomonas seymouri и Leptomonas collosoma 58
4.2 Построение рестрикциошюй карты максикольцевой кпДНК исследованных, видов 60
4.2.1 Построение рестрикционной карты максикольцевой кпДНК Leptomonas seymouri 60
4.2.2 Построение рестрикционной карты максикольцевой кпДНК Leptomonas collosoma 67
4.3 Клонирование и секвенирование рестрнкционпых фрагменнтов ДО и ПЦР-продуктов 70
4.3.1 Клонирование и секвенирование рестрнкционпых фрагменнтов и ПЦР-продуктов ДО максикольцевой кпДНК Leptomonas seymouri 72
4.3.2 Клонирование и секвенирование рестрикционных фрагменнтов и ПЦР-продуктов ДО максикольцевой кпДНК Leptomonas collosoma 86
4.4 Сравнительный анализ CSB-блоков в дивергентной области максикольцевой и в консервативной области миникольцевой кпДНК 89
5. Выводы 92
6. Приложение 93
6.1 Последовательность нуклеотидов участков ДО максикольцевой кп ДН К L eptomonas seymouri и Leptomonas collosoma 93
6.2 Последовательность нуклеотидов консервативной области миникольцевой кпДНК Lep. seymouri, Lep. collosoma и других видов 100
Список литературы 102
