Введение
1. Литературный обзор 14
1.1. Красные водоросли - источник биологически активных соединений 14
1.2. Фотосинтетические пигменты красных водорослей 15
1.3. Факторы, влияющие на содержание фотосинтетических пигментов красных водорослей 20
1.4. Химическая структура полисахаридов красных водорослей 23
1.5. Особенности структурного анализа полисахаридов красных водорослей 27
1.5.1. Химические методы 28
1.5.2. Физико-химические методы 30
1.5.2.1. ИК-спектроскопия с Фурье-преобразованием 30
1.5.2.2. Спектроскопия 13СЯМР 33
1.5.2.3. Спектроскопия ЯМР 36
1.5.3. Ферментативные методы 37
1.6. Физико-химические свойства полисахаридов красных водорослей 40
1.7. Факторы, влияющие на качественные и количественные характеристики полисахаридов 44
1.8. Области использования полисахаридов красных водорослей 51
1.9. Биологическая активность полисахаридов 53
2. Результаты и обсуждение 57
2.1. Фотосинтетические пигменты красной водоросли A. flabelliformis 57
2.1.1. Факторы среды обитания водоросли 57
2.1.2. Пигментный состав водоросли A. flabelliformis в зависимости от факторов среды ее обитания 59
2.2. Полис ахаридный состав водоросли A. flabelliformis (карпо спорофит) в зависимости от факторов среды ее обитания 64
2.2.1. Содержание сухого вещества и общего растворимого белка в талломах А. flabelliformis 65
2.2.2. Количественный и качественный состав полисахаридов 67
2.3. Комплексное выделение фикобилипротеинов и полисахаридов водоросли А. flabelliformis 72
2.3.1. Выделение фикобилипротеинов и полисахаридов 73
2.3.2. Фракционирование фикобилипротеинов 75
2.3.3. Химический и структурный анализ полисахаридов 76
2.4. Структура полисахарида, выделенного из стерильной формы A. flabelliformis
2.4.1. Выделение, фракционирование и химический анализ полисахаридов... 78
2.4.2. Структурный анализ желирующего полисахарида 80
2.4.2.1. ИК-Фурье спектроскопия 80
2.4.2.2. Спектроскопия 1Я и 13С ЯМР 81
2.4.2.3. МАЛДИ масс-спектрометрия 85
2.5. Структура и свойства полисахарида, выделенного из репродуктивной (карпоспорофит) формы A. flabelliformis 91
2.5.1. Выделение и фракционирование полисахаридов ионообменной хроматографией 91
2.5.2. Очистка полисахарида от белка 94
2.5.3. Структурный анализ суммарного полисахарида методом ИК-Фурье спектроскопии 96
2.5.4. Фракционирование и химический анализ полисахаридов из А. flabelliformis 97
2.5.5. Структурный анализ желирующего полисахарида ИК- и ЯМР спектроскопией 98
2.5.6. Мягкий кислотный гидролиз полисахарида из A. flabelliformis 101
2.5.7. Масс-спектрометрический анализ продуктов ферментативного гидролиза полисахарида из A. flabelliformis 106
2.6. Биологическая активность полисахаридов из стерильной и репродуктивной форм A. flabelliformis Ill
2.6.1. Антикоагулирующая активность полисахаридов A. flabelliformis Ill
2.6.2. Влияние полисахаридов A. flabelliformis на образование АФК 113
3. Экспериментальная часть 115
3.1. Водоросли 115
3.2. Определение сухого вещества водоросли 115
3.3. Выделение фотосинтетических пигментов 115
3.3.1. Экстракция ФБП 0,1 М фосфатным буфером (метод 1) 115
3.3.2. Экстракция ФБП 1,5% водным раствором нитрата натрия (метод 2) 116
3.3.3. Выделение хлорофилла а и каротиноидов 116
3.3.4. Идентификация фотосинтетических пигментов 117
3.4. Выделение и фракционирование полисахаридов 118
3.5. Основные аналитические методы 118
3.6. Мягкий кислотный гидролиз 121
3.7. Ферментативный гидролиз 121
3.8. Определение молекулярной массы 122
3.8.1. Вискозиметрический метод 122
3.8.2. Молекулярные массы низкомолекулярных (НМ) производных полисахаридов 122
3.9. Очистка полисахарида от белка 123
3.9.1. Обработка полисахарида протеазой из Streptomyces caespitosus 123
3.9.2. Очистка полисахарида от белка по методу Севага 123
3.10. Хроматографические методы 123
3.10.1. Ионообменная хроматография на ДЕАЕ-целлюлозе 123
3.10.2. Гельпроникающая хроматография на биогеле Р-10 124
3.10.3. Адсорбционная хроматография на фосфате кальция 124
3.10.4. Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) 124
3.10.5. Хромато-масс-спектрометрия 125
3.11. Физические методы анализа 125
3.11.1. ИК-спектроскопия 125
3.11.2. Спектроскопия ЯМР 125
3.11.3. Масс-спектрометрия 125
3.12. Биологическая активность полисахаридов 126
3.12.1. Антикоагулирующая активность 126
3.12.2. Влияние полисахаридов на образование активных форм кислорода (АФК) 127
3.13. Измерение параметров условий обитания водоросли 128
3.14. Статистический анализ 128
4. Выводы 130
5. Список литературы
