Введение
1. Обзор литературы 7
1.1 Фотосенсибилизаторы и клеточная гибель 7
1.1.1 Фотосенсибилизаторы и механизмы образования АФК 7
1.1.2 Возможные молекулярные механизмы клеточной гибели при воздействии ФС 14
1.1.3 Генетически кодируемые фотосенсибилизаторы. Семейство KillerRed 21
1.2 Апоптоз и сенсоры для его детекции 36
1.2.1 Введение 36
1.2.2 Механизмы развития апоптоза 37
1.2.3 Каспазы 40
1.2.4 Каспаза-3 42
1.2.5 Апоптоз, некроз и медицинская терапия 45
1.2.6 Сенсоры для детекции апоптоза 46
2. Материалы и методы 59
2.1 Материалы 59
2.2 Методы
2.2.1 Получение генетических конструкций 62
2.2.2 Работа по выделению белка 66
2.2.3 Работа с клеточными культурами 68
2. Результаты и обсуждение 74
3.1 Светоиндуцируемая гибель клеток млекопитающих с помощью генетически кодируемых фотосенсибилизаторов 74
3.1.1 KillerOrange: первый генетически кодируемый фотосенсибилизатор в оранжевой области спектра 75
3.1.2 SuperNova и SuperNova-2: мономерные варианты KillerRed 79
3.2 Детекция клеточной гибели с помощью флуоресцентных белков 84
3.2.1 Выбор белков-доноров и акцептора
3.2.2 Бактериальная экспрессия сенсоров на активность каспазы-3 86
3.2.3 Эукариотическая экспрессия сенсоров на активность каспазы-3 89
Выводы 104
Заключение 105
Список сокращений 107
Список использованной литературы 109
