Введение
1. Введение 5
2. Обзор литературы 10
2.1. Молекулярная биология ВГВ 10
2.1.1. Структура и организация генома 10
2.1.2. Вирусные белки 14
2.1.3. Структура капсида 18
2.1.4. Жизненный цикл ВГВ 21
2.1.5. Репликация ВГВ 25
2.2. Молекулярные варианты ВГВ 27
2.2.1. Генотипы ВГВ 27
2.2.2. Сочетанное инфицирование различными генотипами ВГВ 31
2.2.3. Рекомбинация 32
2.2.4. Методы генотипирования ВГВ 33
3. Материалы и методы 35
4. Результаты собственных исследований 43
4.1. Филогенетический анализ полноразмерных нуклеотидных последовательностей ВГВ 43
4.2. Генотипирование ВГВ в популяциях больных гепатитом В Санкт-Петербурге и Якутии 52
4.2.1 Разработка стратегии генотипирования ВГВ методом PCR- RFLP потрем участкам генома 52
4.2.2. Генотипирование вариантов ВГВ, циркулирующих в Санкт-Петербурге, методом PCR-RFLP по трем участкам генома 57
4.2.3. Генотипирование вариантов ВГВ, циркулирующих в Санкт-Петербурге, методом амплификации с типоспецифичными праймерами 61
4.2.4. Определение генотипа ВГВ у больных острым гепатитом В 63
4.2.5. Генотипирование вариантов ВГВ, циркулирующих в Якутии 63
4.3. Определение нуклеотидных последовательностей фрагментов генома ВГВ. Компьютерный анализ, полученных последовательностей 65
4.3.1. Секвенирование и филогенетический анализ нуклеотидных последовательностей ВГВ 65
4.3.2. Анализ аминокислотных замен 70
4.4. Секвенирование и анализ рекомбинантного генома ВГВ из Санкт- Петербур га 79
4.4.1. Доказательства рекомбинантной природы изолята ВГВ. Картирование участков рекомбинации 79
4.2.2. Анализ аминокислотных замен 88
5. Обсуждение результатов 93
5.1. Генотипирование вариантов ВГВ у больных ХГВ в Санкт-Петербурге и Якутии 93
5.2. Гомологичная рекомбинация у ВГВ 97
Выводы 105
