Введение
1. Обзор литературы 7
1.1. Протеинопатии 7
1.1.1. Протеинопатии 7
1.1.2. Неправильный фолдинг белков и агрегация 9
1.1.3. Амилоидные фибриллы 12
1.1.4. Защитные внутриклеточные механизмы, активируемые при протеинопатиях 13
1.2. Болезнь Альцгеймера 15
1.2.1. Болезнь Альцгеймера 15
1.2.2. Р-амилоид, протеолитический процессинг белка АРР, мутации, ассоциированные с болезнью Альцгеймера 17
1.2.3. Агрегация Р-амилоид а, образование нейротоксических агентов
1.3. Роль ионов цинка в развитии болезни Альцгеймера 23
1.4. Металлсвязывающий домен Ар 24
1.4.1. Роль мутаций и посттрансляционных модификаций металлсвязывающего домена Ар
в патогенезе болезни Альцгеймера 26
1.4.1.1. Мутации металлсвязывающего домена Ар 26
1.4.1.2. Посттрансляционные модификации металлсвязывающего домена Ар 27
1.4.1.3. Металлсвязывающий домен Ар крыс и мышей 28
2. Материалы и методы исследований 29
2.1. Объекты и материалы 29
2.1.1. Использованные реактивы 29
2.1.2. Ар, его фрагменты и модифицированные формы 29
2.1.3. Клеточная культура 31
2.2. Методы исследований 31
2.2.1. Определение концентраций 31
2.2.2. Изотермическая калориметрия титрования з
2.2.2. Оптический биосенсор, работающий на эффекте поверхностного плазмонного резонанса 34
2.2.3. Масс-спектрометрия с ионизацией распылением в электрическом поле 36
2.2.4. Гибридный квантово-механический/молекулярно-механический метод 38
2.2.5. Спектроскопия ЯМР 41
2.2.6. Проточная цитофлуорометрия 44
3. Результаты и их обсуждение 45
3.1. Определение минимального цинк-связывающего сайта в металлсвязывающем домене Ар человека 45
3.2. Определение сайта димеризации металлсвязывающего домена Ар 52
3.3. Влияние модификаций в металлсвязывающем домене Ар на его взаимодействие с ионами цинка 56
3.3.1 Механизм цинк-зависимой димеризации металлсвязывающего домена Ар крысы 56
3.3.2. Влияние фосфорилирования остатка серина в положении восемь металлсвязывающего домена Ар человека на его взаимодействие с ионами цинка 63
3.3.3. Влияние мутации остатка гистидина в положении шесть металлсвязывающего домена Ар человека на его взаимодействие с ионами цинка 72
3.3.4. Влияние изомеризации остатка аспарагиновой кислоты в положении семь Ар человека на его нейротоксические свойства 77
3.4. Молекулярный механизм цинк-зависимой димеризации металлсвязывающего домена Ар
человека и его патогенных модификаций 81
Выводы 83
Список сокращений и условных обозначений 84
Приложение 86
Благодарности 92
Список литературы
