Введение
Глава 1. Обзор литературы
Микробные биопленки и современные подходы к диагностике и Лечению воспалительных заболеваний пародонта 21
1.1. Современные представления об инфекционной этиологии воспалительных заболеваний пародонта и роли биопленок 21
1.2. Пародонтопатогенные бактерии и факторы микроокружения 24
1.3. Взаимосвязь процессов микробной адгезии и колонизации при формировании Биопленки в полости рта 39
1.4. Моделирование биопленок в экспериментах in vitro и in vivo 43
1.5. Антибактериальная терапия и опыт изучения резистентности бактерий к антибиотикам, формирующейся в биопленках 47
1.6. Значение взаимодействий, ассоциированных с факторами врожденного иммунитета при заболеваниях пародонта 59
1.7. Резюме 74
Глава 2. Материалы и методы исследования 77
2.1. Дизайн и объекты диссертационного исследования 77
2.2. Методы клинического обследования пациентов 83
2.3. Характеристика стоматологических материалов 86
2.4. Характеристика штаммов микроорганизмов 86
2.5. Методы микроскопического исследования
2.5.1. Световая и иммунолюминесцентная микроскопия 87
2.5.2. Сканирующая электронная микроскопия 88
2.5.3 просвечивающая трансмиссионная электронная микроскопия 88
2.5.4. Сканирующая зондовая атомно-силовая микроскопия 89
2.6. Методы бактериологического исследования 89
2.6.1. Взятие материала для исследования 89
2.6.2. Выделение чистых культур и их идентификация 90
2.6.3. Определение чувствительности к антибактериальным препаратам
2.7. Изучение первичной микробной адгезии in vitro 92
2.8. Модель формирования микробной биопленки in vitro 94
2.9. Экспериментальная модель пародонтита in vivo на лабораторных животных (крысах) 95
2.10. Прямое белковое профилирование штаммов анаэробных бактерий с помощью масс-спектрометрии 16s-рибосомальных белков
2.11. Определение генетических маркеров пародонтопатогенных бактерий и грибов кандида с помощью мультиплексной пцр 97
2.11.1. Взятие образцов материала для пцр 97
2.11.2. Выделение днк 98
2.11.3. Амплификация днк 98
2.11.4. Детекция продуктов амплификации 99
2.11.5 обратная гибридизация днк 100
2.12. Определение генетических маркеров резистентности к антибиотикам с помощью ПЦР 101
2.12.1. Взятие исследуемого материала и выделение днк 101
2.12.2. Идентификация днк с помощью пцр 101
2.12.3. Детекция днк методом электрофореза 102
2.13. Иммуноферментный анализ (твердофазный метод) 103
2.13.1. Иммуноферментный анализ содержания антител к грибам рода candida в сыворотке крови 103
2.13.2. Иммуноферментный анализ содержания интерлейкинов в сыворотке крови и десневой жидкости 104
2.13.3. Иммуноферментный анализ содержания дефензинов hnp 1-3 в сыворотке крови и десневой жидкости 105
2.14. Определение количества лейкоцитов периферической крови и десневой
Жидкости 106
2.15. Определение функциональной активности нейтрофилов 106
2.16. Иммунофенотипирование лейкоцитов и идентификация toll-like-рецепторов на клетках десневой жидкости 106
2.17. Статистические методы и критерии
2.17.1. Диаграмма квантилей 107
2.17.2. Критерий манна — уитни 108
2.17.3. Критерий хи-квадрат 108
2.17.4. Двусторонний критерий фишера 108
2.17.5. Величина относительного риска 108
Глава 3. Характеристика микробной биопленки в эксперименте и клинических условиях 109
3.1. Экспериментальная модель формирования микробной биопленки in vitro 109
3.2. Сравнительное изучение поверхности образцов стоматологических полимерных материалов и первичной адгезии в эксперименте in vitro 122
3.3. Математическая модель для прогнозирования интегральной микробной адгезии пародонтопатогенных бактерий 134
3.4. Характеристика микробной колонизации шин из полимерных материалов, предложенных для лечения хронического пародонтита 140
3.5. Экспериментальное обоснование применения пробиотических штаммов для колонизации пародонта на крысиной модели воспаления пародонта in vivo 149
Глава 4. Результаты клинико-микробиологических исследований: оценка ассоциаций пародонтопатогенных видов и их взаимосвязи с клиническими параметрами 162
4.1. Результаты объективного клинического обследования пациентов с индексной оценкой состояния тканей пародонта 162
4.2. Сравнительная микробиологическая характеристика пациентов по Нозологическим формам (хронический гингивит, хронический пародонтит, кандида ассоциированный пародонтит) 170
4.2.1. Микроскопическая характеристика смешанной микробной биопленки пародонта в норме 171
4.2.2. Микроскопическая характеристика смешанной микробной биопленки пародонта при хроническом гингивите
4.2.3 Микроскопическая характеристика смешанной микробной биопленки пародонта при хроническом пародонтите 174
4.2.4 Микроскопическая характеристика смешанной микробной биопленки пародонта при кандида-ассоциированном пародонтите
4.3. Результаты исследования биопленки на наличие молекулярных маркеров пародонтопатогенных бактерий 177
4.4. Сравнительная характеристика состава пародонтопатогенов в биопленке и десневой жидкости 182
4.5. Результаты исследования резистентности к антибактериальным препаратам штаммов биопленкопродуцирующих и культивируемых пародонтопатогенных бактерий 194
Глава 5. Результаты клинико-иммунологических исследований: особенности врожденного иммунитета у больных хроническим пародонтитом 203
5.1. Количественный состав популяций лейкоцитов периферической крови 203
5.2. Функциональная активность нейтрофилов в периферической крови и Полости рта 207
5. 3. Экспрессия лейкоцитарных эндогенных антимикробных пептидов 209
5.4. Экспрессия на лейкоцитах десневой жидкости рецепторов врожденного Иммунитета tlr-2 и tlr-4 217
5.5. Цитокиновый профиль десневой жидкости, биопленки пародонта и плазмы Периферической крови 227
Обсуждение результатов 237
Заключение 268
Выводы 272
Практические рекомендации и перспективы дальнейших
Разработок 276
Приложения 278
Список литературы 282
