Введение
ГЛАВА I. Материалы и методы 46
Краткое описание наиболее важных методов 46
1. Перевиваемые и первичные клеточные линии 46
2. Конструирование плазмид 47
3. Трансфекция и вирусная инфекция 47
4. Стандартизация вирусной инфекции 47
5. Получение и очистка VLP 47
6. Поверхностное иодирование белков оболочки вирусных частиц 48
7. Конструкция рекомбинантных вирусов осповакцины 49
8. РНК и анализ на микрочипах 49
9. Амплификация методом RT-PCR 49
10. Выделение РНК и синтез кДНК 49
11. Количественный анализ RT-PCR 50
12. Последовательности праймеров и зондов 50
13. Изоляция белков липидного рафта 50
14. Внутримышечная иммунизация 51
15. Определение чувствительности ВИЧ/SIV к нейтрализации специфическими антителами или нейтрализующей активности антител 51
16. Оценка показателей клеточного иммунитета 51
17. Определение вируцидной активности кандидатов в микробициды 52
18. Анализ связывания gp120 c CD4 в присутствии кандидатов в микробициды 52
19. Анализ цитотоксичности компаундов 52
ГЛАВА 2. Биологические свойства гликопротеинов ENV 53
2.1. Сборка белков Env с полноразмерным и укороченным цитоплазматическим доменом 53
2.2. Влияние цитоплазматического домена Env на включение гетерологичных белков в оболочку ВИЧ 63
2.3. Влияние Env на вирусную репликацию и чувствительность к нейтрализации 71
2.4. Роль гликопротеина Env на ранних и поздних стадиях SIV инфекции 82
ГЛАВА 3. Влияние цитоплазматического домена гликопротеина env на конформацию функциональных областей gp120 96
3.1. Влияние цитоплазматического домена на стабильность тримеров Env 96
3.2. Влияние цитоплазматического домена на области gp120, ответственные за связывание с рецептором 104
3.3.Влияние цитоплазматического домена на области gp120, ответственные за связывание с корецептором 111
ГЛАВА 4. Модификация гликопротеинов env для создания вакцины против ВИЧ на основе вирусоподобных частиц (VLP)...
4.1. Иммуногенность нативных белков Env SIV 116
4.2.Усиление иммуногенности Env ВИЧ с помощью изменения сигналов эндоцитоза в цитоплазматическом домене 120
4.3.Усиление иммуногенности Env, содержащих мутации, влияющие на гликозилирование 128
4.4. Влияние модификаций цитоплазматического домена на иммуногенность Env 135
4.5. Иммуногенность VLP, содержащих вспомогательные иммуностимуляторы 146
4.6. Индукция специфических иммунных ответов VLP на слизистых оболочках 161
4.7. Использование VLP для создания вакцины против ВИЧ 165
ГЛАВА 5. Разработка микробицидов против ВИЧ-1 172
5.1. Предупреждение инфекции ВИЧ-1 с помощью синтетических порфиринов 174
5.2. Предупреждение инфекции ВИЧ-1 с помощью фталоцианинов. 185
5.3. Предупреждение инфекции ВИЧ-1 с помощью платиновых триазинов 192
5.4. Сульфированные нафтиловые порфирины как средство против ВИЧ-1 198
5.5. Параметры ингибирования инфекции ВИЧ-1 с помощью анионных микромолекул-кандидатов в микробициды 203
Обсуждение 215
Выводы 236
Список литературы
