Введение
Глава 1. Обзор литературы 12
1.1. ВИЧ-инфекция 12
1.2. Вакцины против ВИЧ-1/СПИД 1.2.1. Проблемы, возникающие на пути создания эффективного средства 16 против ВИЧ-инфекции
1.2.2. Стратегии создания вакцины против ВИЧ-1 17
1.3. Нейтрализующие антитела широкого спектра действия 20
1.3.1. Первое поколение нейтрализующих ВИЧ-1 антител широкого 21 спектра действия
1.3.2. Второе поколение нейтрализующих ВИЧ-1 антител широкого 22 спектра действия
1.4. Подходы к решению задачи создания эффективного иммуногена, 28 обеспечивающего индукцию антител широкого спектра действия
1.5. Метод фагового дисплея 1.5.1. Фаговые пептидные библиотеки 3 6
1.5.2. Возможности технологии фагового дисплея 38
1.5.3. Применение технологии фагового дисплея при изучении ВИЧ
1.5.3.1. Изучение антигенной структуры белков ВИЧ-1 40
1.5.3.2. Исследование нейтрализующих ВИЧ-1 антител широкого спектра действия
1.5.3.3. Исследование поликлональных антител, направленных против вирусных эпитопов
Заключение к литературному обзору до
Глава 2. Материалы и методы 50
2.1. Материалы 50
2.1.1. Реактивы 50
2.1.2. Пептиды, бактериальные штаммы, моноклональные антитела 51
2.1.3. Культуральные среды 51
2.1.4. Магнитные частицы 51
2.1.5. Фаговые пептидные библиотеки 51
2.1.6. Плазмиды, несущие гены ВИЧ-1 52
2.1.7. Растворы 52
2.2. Методы
2.2.1. Аффинная селекция 53
2.2.2. Выявление последовательностей рандомизированных вставок, экспонированных на фагах, неспецифично связывающихся с полистирольными планшетами
2.2.3. Титрование фагов с использованием клеток Е. coli ER2738 55
2.2.4. Выделение и наработка индивидуальных фаговых клонов 55
2.2.5. Выделение фаговой ДНК 55
2.2.6. Дот б лот анализ 56
2.2.7. Вестерн-блот анализ 56
2.2.8. Компьютерный анализ 57
2.2.9. Получение антисывороток к бактериофагам
2.2.10. Получение Env-псевдотипированных вирусов 58
2.2.11. Определение цитопатической дозы 50 % псевдовирусов 58
2.2.12. Реакция вируснейтрализации 59
Глава 3. Результаты и обсуждение 61
3.1. Поиск пептидов-имитаторов эпитопа ВИЧ-1, узнаваемого 61
нейтрализующим моноклональным антителом Z13el
3.1.1. Аффинная селекция фаговых библиотек с моноклональным антителом Z13el и анализ отобранных фаговых клонов
3.1.2. Анализ аминокислотных последовательностей отобранных пептидов 3.1.3. Дот б лот анализ отобранных фаговых клонов 65
3.1.4. Иммуногенные свойства отобранных пептидов в составе 67
бактериофагов
3.2. Результаты аффинной селекции и анализ фаговых клонов, 72
селектированных с использованием моноклонального антитела IgGlbl2
3.2.1. Аффинная селекция фаговых библиотек с моноклональным антителом IgGlbl2 и анализ отобранных фаговых клонов
3.2.2. Характеристика антигенных свойств отобранных клонов 74
3.2.3. Анализ аминокислотных последовательностей пептидов, взаимодействующих с моноклональным антителом IgGlbl2
3.2.4. Оценка способности отобранных фаготопов конкурировать с вирусным антигеном за связывание с моноклональным антителом IgGlbl2
3.2.5. Проверка нейтрализующей активности сывороток животных, иммунизированных бактериофагами
3.3. Результаты аффинной селекции и анализ фаговых клонов, селектированных с использованием моноклональных антител VRC01
3.3.1. Аффинная селекция фаговых библиотек с моноклональным антителом VRC01 и анализ отобранных фаговых клонов
3.3.2. Характеристика антигенных свойств отобранных бактериофагов 84
3.3.3. Компьютерный анализ аминокислотных последовательностей пептидов, взаимодействующих с моноклональным антителом VRC01
3.3.4. Оценка способности отобранных фаготопов конкурировать с МКА 89 VRC01 за связывание с узнаваемым им эпитопом
3.3.5. Модель взаимодействия комплекса VRC01-gpl20 и пептидов, входящих в состав селектированных бактериофагов
3.3.6. Проверка нейтрализующей активности сывороток животных, иммунизированных препаратами бактериофагов
Заключение 99
Выводы 100
Список литературы
