Введение
ГЛАВА 1 Аналитический обзор 13
1.1 Особенности строения и свойства L-фенилаланин-аммоний-лиазы 13
1.2 Научные и практические аспекты получения L-фенилаланин-аммоний-лиазы 26
1.3 Прикладное использование L-фенилаланин-аммоний-лиазы 68
1.4 Обоснование основных направлений исследований, их цель и задачи 72
ГЛАВА 2 Методология проведения исследований 75
2.1 Организация выполнения работы 75
2.2 Объекты исследований 79
2.3 Используемое оборудование 84
2.4 Методы проведения исследований 85
ГЛАВА 3 Разработка технологии получения направленных гидролизатов молочной сыворотки 113
3.1 Выбор ферментов для проведения направленного гидролиза белков молочной сыворотки 113
3.2 Изучение технологических режимов и условий проведения направленного ферментативного гидролиза белков молочной сыворотки 119
3.3 Изучение функциональных свойств направленных гидролизатов белков молочной сыворотки 134
3.4 Заключение по третьей главе 139
ГЛАВА 4 Скрининг и идентификация пигментных дрожжей, продуцирующих L-фенилаланин-аммоний лиазу и их физиолого-биохимические характеристики 143
4.1 Разработка ПНР-системы для идентификации гена pal пигментных дрожжей 143
4.2 Анализ нуклеотидного состава гєнараї у выбранных штаммов дрожжей 148
4.3 Изучение фенотипических особенностей и биохимических свойств выбранных культур для выбора дальнейших объектов исследований 156
4.4 Выбор штамма суперпродуцента L-фенилаланин-аммоний-лиазы 160
4.5 Заключение по четвертой главе 182
ГЛАВА 5 Моделирование и оптимизация технологическогопроцесса получения pal 186
5.1 Подбор компонентов и оптимизация питательной среды для культивирования Aureobasidium pullulans 863 186
5.2 Исследование влияния параметров культивирования пигментных дрожжей на качественные показатели продукта биосинтеза 199
5.3 Разработка технологии выделения и очистки PAL 215
5.4 Заключение по пятой главе 221
ГЛАВА 6 Разработка технологии иммобилизации pal на наночастицы 223
6.1 Сравнительная характеристика химического состава и физических свойств частиц оксида железа Fe203 и Fe304 224
6.2 Оптимизация концентраций конденсирующих агентов, используемых при иммобилизации PAL на частицы Fe203, функционализированные тио-феновыми и сложноэфирными группами 232
6.3 Изучение физико-химических свойств нативной и иммобилизованной PAL 235
Технологическая схема получения иммобилизованной PAL на наночастицы Fe304 247
6.4 Заключение по шестой главе 249
ГЛАВА 7 Разработка технологии лиофилизации PAL 251
7.1 Изучение теплофизических характеристик PAL 252
7.2 Исследование влияния процесса замораживания на активность PAL 254
7.3 Определение криоскопических температур PAL 256
7.4 Моделирование процессов кристаллизации влаги при замораживании 258 ферментного препарата PAL 4
7.5 Изучение влияния режимных параметров лиофилизации на ее продолжи-266 тельность 7.6 Изучение кинетики процесса лиофильной сушки PAL 274
7.7 Заключение по седьмой главе 281
ГЛАВА 8 Практическая реализация результатов исследований 284
8.1. Способ получения белкового эквивалента продукта, предназначенного для лечения больных фенилкетонурией (патент РФ №2376893) 284
8.2 Способ выделения и очистки фермента 286
8.3. Способ получения иммобилизованного фермента 289
8.4. Способ иммобилизации L-фенилаланин-аммоний-лиазы на магнитных наночастицах (патент РФ №2460790) 291
8.5. Способ лиофилизации фермента L-фенилаланин-аммоний-лиазы 294
8.6. Ферментный препарат L-фенилаланин-аммоний лиаза (ТУ 9291-144-02068315-2011) 296
8.7. Заключение по восьмой главе 299
Заключение 300
Список сокращений и условных обозначений 307
Список литературы
